2011 Fiscal Year Annual Research Report
微小環境構築と転写ネットワーク解析による免疫反応制御の分子機構解明
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21390077
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
清水 章 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (00162694)
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| Keywords | 発現制御 / 免疫学 / 遺伝子 |
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| Research Abstract |
これまでの成果を踏まえつつ、免疫反応、特に抗原刺激を受けた後のリンパ球の最終分化および自己反応性の抑制に関連する現象すなわち、クラス変換、高親和性抗体産生細胞の選択、液性免疫記憶の獲得、自己抗体産生・自己攻撃性の抑制などを誘導できる微小環境の再現に引き続き努めた。具体的には、
１. これまでに検討・確立した方法を拡張し、立体的な配置も可能な培養系や各種液性因子（ケモカイン、サイトカイン、リンホカインなど）の併用や逐次添加などによる微小環境再現培養系を構築した。この培養系で各種ストローマ細胞株と別途刺激したＢリンパ球の共培養、あるいは液性因子の経時的制御によって、微小環境の３次元的あるいは経時的な再構築・再現を試みた。
２. 微小環境の３次元的な構築再現系において、ストローマ細胞側で発現している細胞表面 ligand 分子、液性調節因子を経時的・半定量的に解析し、微小環境を代替できる分子刺激を検索し、この情報を上記培養系構築実験にフィードバックした。
これまでの成果と上記実験の結果を随時利用しつつ、リンパ球の側における転写ネットワーク制御について、クラススイッチ組換えの標的制御、体細胞突然変異導入、高親和性抗体産生細胞の選択、液性免疫記憶の獲得、自己抗体産生・自己攻撃性の抑制のそれぞれに関与するものに切り分けつつ更に解析を進めた。すなわち、
４. Id2, 3、Runx2, 3、SIP、CEBP など免疫反応の制御への関与が予想されている転写因子をはじめとする各種遺伝子の破壊マウスのＢリンパ球を上記微小環境再現系における共培養や RAG2 遺伝子破壊マウスへの移植によって反応を評価し、それぞれの反応に関与する因子の同定を試みた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究に必要な核種遺伝子破壊マウスの繁殖が期待されたほどは進まなかったため、研究経費の一部を平成２４年度に繰り越し、一部の実験の実施が遅れたものの、実施計画書および交付申請書に記載し、計画していた実験はほぼ完了し、ほぼ期待通りの結果を得ることができ、微小環境再現培養系がほぼ構築できた等の成果が得られた。
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| Strategy for Future Research Activity |
これまでの成果を踏まえつつ、免疫反応、特に抗原刺激を受けた後のリンパ球の最終分化および自己反応性の抑制に関連する現象すなわち、クラス変換、高親和性抗体産生細胞の選択、液性免疫記憶の獲得、自己抗体産生・自己攻撃性の抑制などを誘導できる微小環境の再現に引き続き努める。具体的には、
1. これまでに検討・確立した方法を拡張し、立体的な配置も可能な培養系や各種液性因子の併用や逐次添加などによる微小環境再現培養系を構築する。この培養系で各種ストローマ細胞株と別途刺激したBリンパ球の共培養、あるいは液性因子の経時的制御によって、微小環境の3次元的あるいは経時的な再構築・再現を試みる。
2. 微小環境の3次元的な構築再現系において、微小環境を代替できる分子刺激を検索し、この情報を上記培養系構築実験にフィードバックする。
以上の結果を随時利用しつつ、リンパ球の側における転写ネットワーク制御について、上記のそれぞれに関与するものに切り分けつつ更に解析を進める。すなわち、
3. Id2, 3、Runx2, 3、SIP、CEBP など免疫反応の制御への関与が予想されている転写因子をはじめとする各種遺伝子の破壊マウスのBリンパ球を上記微小環境再現系における共培養や RAG2 遺伝子破壊マウスへの移植によって反応を評価し、それぞれの反応に関与する因子の同定を試みる。
4. 3.で同定された因子に対して、これに結合し、これを制御する可能性のある因子検索する。候補遺伝子について、各種遺伝子破壊マウスのBリンパ球での遺伝子発現の DNA chip を用いた網羅的検討になどよって、遺伝子破壊によって生ずる発現の差と個々の免疫反応、機能の差を関連づけを行う。これらにより関与する因子の確定を試みる。 以上を総合して、研究成果を取り纏める。
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[Journal Article] Runx3 is required for full activation of regulatory T cells to prevent colitis-associated tumor formation.2011
Author(s)
Sugai, M., Aoki, K., Osato, T., Nambu, Y., Ito, K., Taketo, M. M., Ito, Y. and Shimizu, A.
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Journal Title
J. Immunol,
Volume: 186
Pages: 6515-6520
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Cross-priming of CD8(+) T cells in vivo by dendritic cells pulsed with autologous apoptotic leukemic cells in immunotherapy for elderly patients with acute myeloid leukemia.2011
Author(s)
Kitawaki, T., Kadowaki, N., Fukunaga, K., Kasai, Y., Maekawa, T., Ohmori, T., Itoh, T., Shimizu, A., Kuzushima, K., Kondo, T., Ishikawa, T.and Uchiyama, T.
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Journal Title
Exp. Hematol.
Volume: 39
Pages: 424-433
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Safety and pharmacokinetics of recombinant human hepatocyte growth factor (rh-HGF) in patients with fulminant hepatitis: a phase I/II clinical trial, following preclinical studies to ensure safety.2011
Author(s)
Ido A, Moriuchi A, Numata M, Murayama T, Teramukai S, Marusawa H, Yamaji N, Setoyama H, Kim ID, Chiba T, Higuchi S, Yokode M, Fukushima M, Shimizu A. and Tsubouchi H.
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Journal Title
J. Transl. Med.
Volume: 9
Pages: 55
DOI
Peer Reviewed
