2011 Fiscal Year Annual Research Report
慢性腎臓病の糸球体マイクロプロテオーム解析による病因・病態の解明
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21390262
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
山本 格 新潟大学, 医歯学系, 教授 (30092737)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
矢尾板 永信 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (00157950)
吉田 豊 新潟大学, 医歯学系, 講師 (40182795)
田中 憲一 新潟大学, 医歯学系, 教授 (10126427)
小原 令子 かずさDNA研究所, ゲノム医学研究室, 特定研究支援者 (20392285)
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| Keywords | 慢性腎臓病 / 糸球体 / プロテオーム / 質量分析計 / 抗体 / データベース |
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| Research Abstract |
1.ヒト腎生検試料の糸球体のプロテオーム解析
フォルマリン固定-パラフィン包埋されたヒト正常および慢性腎臓病の腎生検切片からマイクロダイセクション法で糸球体切片を50枚切り出し、新規に開発したOn-Site Direct Digestion法でペプチドを調整した。そのペプチドを質量分析計-検索エンジンンで解析し、約200-800種類のタンパク質を同定した。慢性腎臓病のうち、はじめに腎硬化症、つぎに、膜性腎症、IgA腎症の糸球体を解析した。
2.ヒト正常糸球体と慢性腎臓病糸球体プロテオームの比較
糸球体固有のプロテオームを検出するために、フォルマリン固定-パラフィン包埋試料の糸球体に含まれる血液成分(血漿及び血球)を除くアルゴリズムを構築した。
また、糸球体ペプチド調整中に混入しがちなケラチンなどに由来するペプチドを除くアルゴリズムも構築した。
それらを用いて、糸球体組織固有のタンパク質を検出し、正常と慢性腎臓病の糸球体タンパク質を半定量的に比較し、慢性腎臓病に関与すると考えられるタンパク質を推定した。
バイオインフォマティクスソフトウェアー(Cytoscape,Davidなど)を用いて、疾患糸球体で変化しているタンパク質、その反応系を推定した。また、その検証をHuman Protein Atlasグループと協力して、抗体を用いた免疫組織化学法で行い、それぞれの疾患に特有なタンパク質、反応系を明らかにした。
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