2011 Fiscal Year Annual Research Report
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21591313
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
藤井 克則 千葉大学, 大学院・医学研究院, 講師 (70344992)
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| Keywords | ゲノム / 遺伝学 / 遺伝子 / 癌 / 放射線 |
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| Research Abstract |
PTCH遺伝子は細胞の増殖シグナルに関わる遺伝子であり、その変異は神経皮膚症候群であるGorlin症候群(以下GS)を発症させる。我々はGorlin症候群患者の皮膚に放射線を照射すると基底細胞癌が発症することに着目し、GS由来細胞(皮膚線維芽細胞およびリンパ芽球細胞)を用いて紫外線ないし放射線照射実験を行い、シグナル特異的反応を検討した。細胞はすでに変異を報告している患者由来細胞(de1 915 C)を使用し、正常コントロールと比較して変化を観察している。PTCHの免疫染色については内因性PTCHがかなり少なく、通常のPTCHポリクローナル抗体では染色精度が低かったため複数の各社抗体を比較使用し、実験条件を変更して染色を試みたが差異は認めなかった。
1)放射線照射によるPTCHタンパクの細胞内局在性の変化の観察
昨年度に引き続き、患者由来リンパ芽球細胞ないし皮膚線維芽細胞に対して放射線を照射し、共焦点レーザー顕微鏡を用いてPTCHタンパクの細胞内局在を観察した。PTCHタンパクがX線照射(量)ならびに照射後の時間経過によりその分布が変化するかどうかを観察したが、染色精度が低く明らかな局在の変化は認めなかった。各社のPTCHポリクローナル抗体を使用したがいずれも同様の結果だった。
2)Gorlin症候群におけるPTCH遺伝子変異およびタンパク相互作用への影響の有無
Gorlin症候群における主要組織におけるPTCH遺伝子変異とその腫瘍病型について解析を行っているが現在までに表現型と遺伝型の関連は認めていない。Gorlin症候群のPTCH遺伝子解析を行う上で、エクソン10から17にいたるtandem duplicationの症例を遺伝学的に証明し報告した。PTCH遺伝子は長大であるため、従来遺伝子内部での再構成を我々は報告しており、今回新たな変異様式を見出すことができた。
3)内因性ヘッジホッグタンパクの検出:ヒト皮膚繊維芽細胞におけるヘッジホッグシグナルを構成する分子(Gli1,Gli2,Gli3)のRT-PCRを行い、ヘッジホッグシグナリングが繊維芽細胞内で機能していることを確認した。これらは紫外線照射ならびに放射線照射を行うことで増幅され、阻害剤cyclopamineで阻害を確認した。現在培養液中にヘッジホッグタンパクを加えることでシグナルがどのように変化するか調査中である。
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Research Products
(11 results)
