2010 Fiscal Year Annual Research Report
インフルエンザ脳症の組織培養モデルを用いた薬剤による病態の増悪及び改善の検討
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21591330
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| Research Institution | Fukushima Medical University |
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Principal Investigator |
細矢 光亮 福島県立医科大学, 医学部, 教授 (80192318)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
川崎 幸彦 福島県立医科大学, 医学部, 准教授 (00305369)
橋本 浩一 福島県立医科大学, 医学部, 准教授 (50322342)
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| Keywords | ヒト臍帯静脈血管内皮細胞 / TNF-α / タイトジャンクション / ウェスタンプロット / RNA |
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| Research Abstract |
本年度は臍帯からヒト臍帯静脈血管内皮細胞(HUVEC)の単離培養と、TNF-αのHUVECのタイトジャンクションを構成する蛋白(ZO-1、Claudin-4、Claudin-5、Claudin-12、Occuludin)発現への影響についてm-RNAレベル、蛋白レベルで検討した。タイトジャンクションは血管透過性に関与する蛋白である。
1.HUVECの単離培養。
22年度は本研究への協力の同意が得られた23件のHUVEC単離を行った。
2.10%FCS含培地でのTNF-αのHUVECにおけるタイトジャンクション蛋白m-RNA発現への影響。
TNF-α(1,10pg/ml)を培養液に添加し、HUVECのタイトジャンクション蛋白の経時的変化(time 0,0.5,4,6,8,24時間)をリアルタイムRT-PCRを用いm-RNAレベルで検討した。Claudin-12以外のタイトジャンクション蛋白はTNF-α添加後4時間に発現のピークが認められた。いかなる条件でもtime 0に比較し発現の低下は認められなかった。
3.2%FCS含培地でのTNF-αのHUVECにおけるClaudin-5、Occuludin発現への影響。
TNF-α(0.1,1,10pg/ml)を培養液に添加し、HUVECのClaudin-5、Occuludinの経時的変化(6,12,24時間)をウェスタンブロットで検討した。両蛋白共に添加後6時間では発現に変化は認められなかったが、添加後12時間では、Claudin-5は濃度依存的に発現の低下が認められた。添加後24時間では、両蛋白共に濃度依存的に発現の低下が認められた。
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