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2010 Fiscal Year Annual Research Report

ファゴソームからRab GTPaseをかい離させる結核菌因子の探索

Research Project

Project/Area Number 21790415
Research InstitutionHamamatsu University School of Medicine

Principal Investigator

瀬戸 真太郎  浜松医科大学, 医学部, 助教 (50383203)

Keywords結核菌 / ファゴソーム / プロテオミクス解析 / 二次元電気泳動 / LC-MS/MS
Research Abstract

結核菌ファゴソームのプロテオミクス
結核菌のファゴソーム内での増殖を支持する宿主因子を探索するため、結核菌ファゴソームのプロテオミクス解析を行った。生化学的に単離した結核菌ファゴソームのプロテオミクス解析によって、結核菌ファゴソームに含まれるタンパク質を網羅的に同定した。M.tuberculosis ErdmanをRaw264.7マクロファージに感染させて、ファゴソーム画分をショ糖密度勾配遠心分離法によって単離した。二次元電気泳動法によって展開した結核菌ファゴソーム画分において、銀染色によって200以上のスポットが観察された。リソソーム特異的なタンパク質スポットは見つからず、calreticulin、Grp78、PDIなど小胞体特異的タンパク質が顕著なスポットであった。このことは結核菌ファゴソームと小胞体由来膜小胞の融合、もしくは小胞体と直接融合することを示唆する。次に、結核菌ファゴソーム画分抽出タンパク質の網羅的同定をLC-MS/MS法によって行った。SDS-PAGEで結核菌ファゴソーム画分を展開して、銀染色を行った。切り出したバンドからトリプシン処理後、断片ペプチドを抽出した。抽出したペプチドをnano-LC-MS/MSによって質量解析を行った。結核菌ファゴソーム画分には後期エンドソームマーカータンパク質であるRab7やv-ATPaseのサブユニットタンパク質、リソソームマーカータンパク質であるLAMP-1やLAMP-2などが含まれていた。また、ミトコンドリア特異的シャペロンのCH60も含まれていた。さらに、小胞体タンパク質であるGrp78、PDI、リボソームサブユニットタンパク質も同定した。このことは、結核菌ファゴソームは後期エンドソームやリソソームと融合することができること、しかし、小胞体由来小胞との融合が優先されるために結核菌ファゴソームのファゴソーム熟成が阻害されることを示唆する。

Research Products

(3 results)

All 2011 2010

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Presentation (1 results)

  • [Journal Article] A novel vaccine strategy to induce mycobacterial antigen-specific Th1 responses by utilizing the C-terminal domain of heat shock protein 70.2011

    • Author(s)
      Uto T, Tsujimura K, Uchijima M, Seto S, Nagata T, Suda T, Chida K, Nakamura H, Koide Y.
    • Journal Title

      FEMS Immunol Med Microbiol

      Volume: 61 Pages: 189-196

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Rab GTPases regulating phagosome maturation are differentially recruited to mycobacterial phagosomes.2011

    • Author(s)
      Seto S, Tsujimura K, Koide Y.
    • Journal Title

      Traffic

      Volume: (印刷中)

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] イメージ解析とプロテオミクスによる結核菌ファゴソームの分子解剖2010

    • Author(s)
      瀬戸真太郎、辻村邦夫、小出幸夫
    • Organizer
      第85回日本結核病学会
    • Year and Date
      2010-05-20

URL: 

Published: 2012-07-19  

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