2010 Fiscal Year Annual Research Report
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21790645
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
菅野 敦 東北大学, 病院, 助教 (70509190)
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| Keywords | 膵癌 / 慢性膵炎 / K-ras / miRNA / 膵星細胞 |
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| Research Abstract |
1.K-ras変異を導入した膵管正常上皮細胞株(Human Pancraetic Duct Epithelial Cell : HPDE)と膵星細胞(Pancreatic stellate cell : PSC)の確立
正常膵管上皮細胞株(Human Pancraetic Duct Epithelial Cell : HPDE)にcodon12の変異を有する人癌遺伝子であるKras^<G12V>が組み込まれたretroviral vector pBabepuro-KRAS4B^<G12V>を導入した。HPDEにK-rasが導入されたことを確認済みである。同様の方法で人膵星細胞とラット膵星細胞にもKras^<G12V>を試みている。
2.K-ras変異を導入したHPDEとPSCの共培養により変化を来す遺伝子群の同定
(1)HPDEにKras変異を導入したHPDE-Kras^<G12V>と人膵星細胞を各々共培養し、共培養によって変化する遺伝子群をmicroarrayの手法を用い、その変化を調べている。
(2)同様にその変化をmiRNAについてもmiRNA microarrayの手法を用いて調べる予定である。
(3)HPDE-Kras^<G12V>とPSC共培養し、増殖能、足場非依存性増殖能、scratch assayやBoyden chamberを用いた移動能など腫瘍細胞としてのcharacterizarionを施行中である。
3.慢性膵炎および膵癌症例の組織におけるK-ras変異の検討
慢性膵炎と膵癌の上皮と間質をLaser capture microdissectionの手法を用いて削りだし、RNAを抽出、in vitroの実験にて同定した遺伝子群をreal-time PCRの手法を用いて定量的に解析中である。
4.K-ras変異を導入したHPDEとPSCのin vivoにおける腫瘍形成能の検討
HPDE-Kras^<G12V>とH-PSC-Kras^<G12V>、R-PSC-Kras^<G12V>を単独もしくは混合し、ヌードマウスの皮下、および膵臓に移植し、腫瘍増殖能の検討、ならびに膵星細胞がHPDEに及ぼす影響を調べる予定である。
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