2009 Fiscal Year Annual Research Report
マウス胎児耳胞への遺伝子導入による遺伝性難聴(コネキシン30)の治療法開発
Project/Area Number |
21791623
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Research Institution | Kumamoto University |
Principal Investigator |
三輪 徹 Kumamoto University, 医学部附属病院, 非常勤診療医師 (70535591)
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Keywords | 胎生期内耳 / 遺伝子導入 / 蛋白導入 / コネキシン30 / エレクトロポレーション |
Research Abstract |
先天性難聴には様々な要因があるが、そのうち50%程度は遺伝性難聴によるものと言われている。遺伝性難聴の治療法は未だ存在せず、現在存在するのは人工内耳による代償治療のみとなっている。根本的な治療としては、遺伝子導入による治療法が検討されている。本研究では「胎生期内耳(耳胞)へ正常な遺伝子を導入することにより、遺伝子欠失による難聴の発現は抑制可能である」という仮説を立て、このことをヒトの遺伝子難聴モデルであるコネキシン30(Cx30)ノックアウトマウスを用いて検証することを目的としている。 方法としては、キシラジン、ケタミンにてマウスを全身麻酔後、開腹を行い胎児を子宮とともに体外へ露出する。露出した子宮を自作の手術台に置き、下方よりファイバー光源で照らしながら耳胞を確認し、ガラス管をつないだマイクロマニピュレータを用いてプラスミドを注入する。遺伝子導入法として、ウイルスベクター、リポフェクション、エレクトロポレーションなどの方法がある。2008年にGubblesらが正常マウスの胎生期内耳へエレクトロポレーション法を用いて、Atoh1遺伝子を導入し、機能を持った有毛細胞が新生したと報告した。我々も、エレクトロポレーション法により胎生期内耳への遺伝子導入を試み、遺伝子治療を目指している。 今後、熊本大学生命資源研究・支援センターにて凍結保存を行っているCx30ノックアウトマウス(Cx30-LacZ)を、同センターにて胚の融解、胚移植、産子を作出する。作出したCx30ノックアウトマウスが難聴マウスであることを聴性脳幹反応を用いて確認し、同マウスに正常Cx30遺伝子を導入し、これにより形態的・機能的異常の発現が抑制されるかどうかを検討する。
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