2021 Fiscal Year Research-status Report
レオウイルスベクターを用いた新規粘膜ワクチンの開発に関する研究
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21K19379
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
小林 剛 大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (90324847)
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2021-07-09 – 2023-03-31
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| Keywords | レオウイルス / ワクチンベクター |
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| Outline of Annual Research Achievements |
世界経済に多大な影響を与えている新型コロナウイルス（SARS-CoV2）は、重篤な呼吸器疾患を引き起こすウイルスであり、現在も収束の目処は立っておらず、新規ワクチン開発は急務である。ノロウイルス（NV）は、冬季の感染性胃腸炎の主な原因ウイルスである。NVでは、動物モデルや培養系の開発が遅れており、ワクチンも実用化されていない。本研究では、10分節二本鎖RNAゲノムを有する哺乳類レオウイルス（MRV）の遺伝子改変技術を用いて、SARS-CoV2およびNVに対する粘膜ワクチンの開発基盤の確立を目的とする。
本年度は、SARS-CoV2のSタンパク質およびNVのVP1タンパク質を発現するMRVの開発を行った。Sタンパク質全長を発現できるMRVの作製には成功しなかったが、Sタンパク質の受容体結合部位（RBD）を発現する組換えMRVの作製を試みた結果、MRV S1分節遺伝子内に2A配列を付加したSタンパク質のRBDを挿入することで、MRV sigma1タンパク質とRBDの両方を同時に発現できる組換えMRVの作製に成功した。感染細胞におけるRBDの発現を調べた結果、顕著な発現が認められた。NVのVP1タンパク質を発現する組換えMRVについては、最初に挿入可能な分節遺伝子のスクリーニングを行い、得られた結果を基にMRV S2分節遺伝子内にVP1タンパク質全長およびVP1タンパク質のPドメインを挿入した組換えMRVの作製を行った。現在、組換えMRV感染細胞における搭載遺伝子の安定性およびタンパク質の発現等について詳細な解析を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
本年度は、SARS-CoV2のSタンパク質およびNVのVP1タンパク質を発現するMRVの作製に成功した。一方、SARS-CoV2のSタンパク質全長を発現できる組換えMRVの作製には成功していないことから引き続き研究を進める必要がある。NVのVP1タンパク質を発現するMRVについては、作製に時間を要したことから、in vitro性状解析に遅れがあった。そのため、これまでの成果はMRVを用いたワクチンベクター開発研究を進めるうえで有用と考えられるが、研究目的を達成する上で研究計画の進捗状況はやや遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
SARS-CoV2のSタンパク質の全長を発現できるMRVの開発を引き続き進める。得られたSタンパク質のRBDを発現する組換えMRVについてはマウスに経鼻接種し、免疫学的解析を行う。また、SARS-CoV2のハムスター感染モデルを用いてワクチンベクターとしての評価を行う。本年度、作製したNV VP1タンパク質発現MRVのin vitroにおける詳細な性状解析を行う。組換えMRVをマウスに経口投与し、MRVおよびNV VP1タンパク質に対する免疫学的解析を行う。VP1タンパク質に対する中和抗体の解析にはヒト腸管上皮細胞を用いて評価する予定である。
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| Causes of Carryover |
（理由）本年度は様々な新型コロナウイルスS遺伝子やノロウイルスVP1遺伝子の合成、構築の延期により、組換えウイルスの作製、解析が遅延した。そのため、上記実験経過の都合上、研究費に繰越金が生じた。
（使用計画）次年度請求金額については、研究計画に沿って、今後の推進方策を実施するため、必要な実験試薬を購入する。
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Research Products
(19 results)
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[Journal Article] An increasing trend of human sapovirus infection in Japan, 2009 to 2019: An emerging public health concern2022
Author(s)
Hoque S. A., Nishimura K, Thongprachum A. , Khamrin P. ,Ngan Thi Kim Pham, Islam M. T. , Khandoker n. , Okitsu S, Onda-Shimizu Y , Dey S. K. ,Maneekarn N. , Kobayashi T, Hayakawa S, Ushijima H.
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Journal Title
Journal of Infection and Public Health
Volume: 15
Pages: 315～320
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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[Journal Article] SARS-CoV-2 infection triggers paracrine senescence and leads to a sustained senescence-associated inflammatory response2022
Author(s)
Tsuji S, Minami S, Hashimoto R, Konishi Y, Suzuki T, Kondo T, Sasai M, Torii S, Ono C, Shichinohe S, Sato S, Wakita M, Okumura S, Nakano S, Matsudaira T, Matsumoto T, Kawamoto S, Yamamoto M, Watanabe T, Matsuura Y, Takayama K, Kobayashi T, Okamoto T, Hara E.
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Journal Title
Nature Aging
Volume: 2
Pages: 115～124
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Ultrasensitive detection of SARS-CoV-2 nucleocapsid protein using large gold nanoparticle-enhanced surface plasmon resonance2022
Author(s)
Yano T, Kajisa T, Ono M, Miyasaka Y, Hasegawa Y, Saito A, Otsuka K, Sakane A, Sasaki T, Yasutomo K, Hamajima R, Kanai Y, Kobayashi T, Matsuura Y, Itonaga M, Yasui T.
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Journal Title
Scientific Reports
Volume: 12
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] The Detection of Rotavirus Antigenemia by Immunochromatographic Kits: a Case Series2021
Author(s)
Ushijima H, Hikita T, Kobayashi M, Ngan TKP, Onda-Shimizu Y, Kawagishi T, Okitsu S, Kanai Y, Kobayashi T, Tung P, Ariful SH, Takanashi S, Komoto S, Kattareeya K, Taniguchi K, Niwat M, Hayakawa S, Pattara K.
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Journal Title
Clinical Laboratory
Volume: 67
Pages: 2275～2282
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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[Journal Article] Epidemiology and genetic diversity of group A rotavirus in pediatric patients with acute gastroenteritis in Thailand, 2018-20192021
Author(s)
Nutthawadee J, Kattareeya K, Arpaporn Y, Kanai Y, Okitsu S, Kobayashi T, Nuthapong U, Ushijima H, Niwat M, Pattara K.
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Journal Title
Infection, Genetics and Evolution
Volume: 95
Pages: 104898～104898
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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[Journal Article] DsRNA Sequencing for RNA Virus Surveillance Using Human Clinical Samples2021
Author(s)
Izum T, Morioka Y, Urayama S, Motooka D, Tamura T, Kawagishi T, Kanai Y, Kobayashi T, Ono C, Morinaga A, Tomiyama T, Iseda N, Kosai Y, Inokuchi S, Nakamura S, Tanaka T, Moriishi K, Kariwa H, Yoshizumi T, Mori M, Matsuura Y, Fukuhara T.
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Journal Title
Viruses
Volume: 13
Pages: 1310～1310
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Combining machine learning and nanopore construction creates an artificial intelligence nanopore for coronavirus detection2021
Author(s)
Taniguchi M, Minami S, Ono C, Hamajima R, Morimura A, Hamaguchi S, Akeda Y, Kanai Y, Kobayashi T, Kamitani W, Terada Y, Suzuki K, Hatori N, Yamagishi Y, Washizu N, Takei H, Sakamoto O, Naono N, Tatematsu K, Washio T, Matsuura Y, Tomono K.
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Journal Title
Nature Communications
Volume: 12
Pages: 3726～3726
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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