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2011 Fiscal Year Annual Research Report

K-ras遺伝子変異はGST-πを介して大腸発癌を促進する

Research Project

Project/Area Number 22590700
Research InstitutionThe University of Tokushima

Principal Investigator

高山 哲治  徳島大学, 大学院・ヘルスバイオサイエンス研究部, 教授 (10284994)

KeywordsGST-π / K-ras / 大腸発癌
Research Abstract

【目的】われわれはこれまで、大腸発癌の初期病変ではK-ras変異によりGlutathione S-transferase (GST)-πが誘導されることを報告した。本研究では、GST-πノックアウト(KO)マウス由来大腸細胞に変異K-ras遺伝子を導入し、細胞増殖やアポトーシスの変化を調べることにより、大腸発癌におけるGST-πの役割を明らかにする。また、siRNAを用いてK-ras変異陽性大腸癌細胞のGST-πをノックダウン(KD)し、細胞増殖に及ぼす効果や機序、K-ras下流に存在するMAP kinaseとの関係を明らかにする。
【方法と結果】(1)GST-πノックアウト(KO)マウス由来大腸細胞に変異K-RAS遺伝子を導入し、G418耐性細胞GSTKO/RAS1-3を樹立した。GSTKO/RAS1及びGSTKO/RAS2を培養してMTT assayを行ったところ、いずれもGSTKO/neoに比べ細胞増殖が高まっていた。(2)GST-πsiRNAを用いてK-ras変異陽性大腸癌細胞株M7609のGST-π発現をノックダウシ(KD)し、細胞増殖活性をMTT assayにより調べたところ、GST-πKD(M7609GSTsiRNA)細胞では親株に比べて有意に低下していた。(3)M7609GSTsiRNAにおけるP-RAF,p-MEK,P-ERKの発現をWestern blot法により調べたところ、いずれも有意に発現が低下していた。(4)M7609のcytosolに抗p-RAF抗体を添加して免疫沈降を行い、抗GST-π抗体でWestern blotを行い、GST-πとp-RAFの結合を確認した。
【考察】大腸発癌においては、GST-πがp-RAFと直接結合することにようp-RAFを安定化し、さらにMEK,ERKを活性化して細胞増殖を促進することにより、発癌を促進することが明らかとなった。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

GST-πノックアウトマウ不由来の大腸細胞を用いた変異K-RAS遺伝子の導入実験及びsiRNAを用いたノックダウン細胞を用いた実験が順調に進んでいる。

Strategy for Future Research Activity

順調に進んでおり、とくに研究計画の変更などは無い。
今後は、GST-πとMAPkinaseであるRAFやJNKなどとの関係を詳細に検討する。

  • Research Products

    (3 results)

All 2012 2011

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Presentation (1 results)

  • [Journal Article] A mechanism for abnormal angiogenesis in human radiation proctitis : analysis of expression profile for angiogenic factors2012

    • Author(s)
      Takeuchi H, Tatayama T, et al
    • Journal Title

      Journal of Gastroenterology

      Volume: 47 Pages: 56-64

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Randomized double-blind trial of sulindac and etodolac to eradicate aberrant crypt foci and to prevent sporadic colorectal polyps2011

    • Author(s)
      Takayama T, Niitsu, et al
    • Journal Title

      Clinical Cancer Research

      Volume: 17 Pages: 3803-3811

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Colon cancer prevention targeting GST-π2011

    • Author(s)
      Takayama T
    • Organizer
      第70回日本癌学会総会
    • Place of Presentation
      名古屋国際会議場(名古屋市)
    • Year and Date
      2011-10-04

URL: 

Published: 2013-06-26  

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