歯周組織再生過程におけるアネキシンＡ５の機能の組織学的解析

2012 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 22592053
• Research Institution: Tsurumi University
• Principal Investigator: 島田 明美 鶴見大学, 歯学部, 助教 (00339813)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 二藤 彰 鶴見大学, 歯学部, 教授 (00240747)
• Project Period (FY): 2010-04-01 – 2013-03-31
• Keywords: 歯根膜 / 組織幹細胞 / アネキシンA5（Anxa5） / 腱 / アポトーシス

Research Abstract

アネキシンa5遺伝子にLacZをノックインしたマウス（Anxa5-LacZ）を用いたこれまでの解析から、Anxa5は歯根膜ペリサイトのみならず、歯根表面や骨表面などで強く発現することが確認された。
そこで、Anxa5-LacZ+/-の交配で得られたAnxa5+/+、Anxa5+/-、Anxa5-/-の3遺伝子型マウスの骨形態計測を行った。骨長や骨幹部の形態に有意な差は認められないが、Anxa5-/-では腱や靭帯が付着する部位で特異的な骨形態の違いが観察された。この違いは若齢マウスでは認められず、運動に伴い生じる変化であることが推測された。Anxa5の骨リモデリングへの関与をさらに詳細に解析するため、in vitroで腱細胞と骨芽細胞の関係を調べた。
まず腱細胞の初代培養法を検討した。尾腱組織を採取し、コラーゲンゲル培養により出現する細胞を調べたところ、ScleraxisやTenomodulinなど腱細胞マーカーを多く発現しており、腱細胞の特徴を有することが確認された。野生型マウスから得られたこの初代腱細胞の培養上清を骨芽細胞系のMC3T3-E1細胞に添加すると、MC3T3-E1のアルカリホスファターゼ活性が低下すると共に、DAPIで濃染される顆粒が出現した。免疫染色とWestern blot解析によりcleaved caspase-3の発現が認められたことから、腱細胞に由来する可溶性因子によって骨芽細胞のアポトーシスが誘導されることが示唆された。
今後、Anxa5+/+、Anxa5+/-、Anxa5-/-の3遺伝子型のマウスから腱細胞を培養し、骨芽細胞への添加を行い、Anxa5-/-マウスにおける腱付着部の骨形態の変化におけるAnxa5の関与を明らかにする予定である。

Current Status of Research Progress

Reason

24年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

24年度が最終年度であるため、記入しない。

Research Products

• [Journal Article] Negligible immunogenicity of terminally differentiated cells derived from iPSCs or ESCs. (2013)
  • Author(s): Araki R, Uda M, Hoki Y, Sunayama M, Nakamura M, Ando S, Sugiura M, Ideno H, Shimada A, Nifuji A, Abe M.
  • Journal Title: Nature Volume: 494 Pages: 100-104
  • DOI: 10.1038/nature11807
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Predominant expression of H3K9 methyltransferases in prehypertrophic and hypertrophic chondrocytes during mouse growth plate cartilage development. (2013)
  • Author(s): Ideno H, Shimada A, Imaizumi K, Kimura H, Abe M, Nakashima K, Nifuji A.
  • Journal Title: Gene Expr Patterns Volume: 13 Pages: 84-90
  • DOI: 10.1016/j.gep.2013.01.002
  • Peer Reviewed
• [Presentation] アレンドロネートの細胞内取込みによる骨形成の促進
  • Author(s): 小松浩一郎、島田 明美、出野 尚、柴田 達也、中島 和久、二藤 彰
  • Organizer: 第30回日本骨代謝学会学術集会
  • Place of Presentation: 京王プラザホテル、東京
• [Presentation] Soluble factors may mediate signals from tendons to bone.
  • Author(s): Satoshi Wada, Akemi Shimada, Hisashi Ideno, Yoshiki Nakamura, Kazuhisa Nakashima, Akira Nifuji
  • Organizer: 第35回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場、福岡
• [Presentation] Histone 3 lysine 9 methyltransferases G9a, GLP and SETDB1 are predominantly expressed in the prehypertrophc chondrocytes during the growth plate chondrocyte development
  • Author(s): Hisashi Ideno, Akemi Shimada, Taichi Kamiunten, Kazuhiko Imaizumi, Hiroshi Kimura, Kazuhisa Nakashima, Akira Nifuji
  • Organizer: 第35回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場、福岡
• [Presentation] Expression of three histone 3 lysine 9 methyltransferases during development of mouse molar.
  • Author(s): Taichi Kamiunten, Akemi Shimada, Hisashi Ideno, Yoshiki Nakamura, Hiroshi Kimura, Kazuhisa Nakashima, Akira Nifuji
  • Organizer: 第35回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場、福岡
• [Presentation] Limited and comparable immunogenicity of terminally differentiated cells derived from both iPSCs and ESCs.
  • Author(s): Masahiro Uda, Ryoko Araki, Yuko Hoki, Misato Sayama, Miki Nakamura, Syunsuke Andou, Mayumi Sugiura, Hisashi Ideno, Akemi Shimada, Akira Nifuji, Masumi Abe
  • Organizer: 第35回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場、福岡