2023 Fiscal Year Research-status Report
Nrf2を介したTAM-cancerクロストークによる肝癌薬剤耐性機序の解明
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22K08753
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Research Institution | The University of Tokushima |
Principal Investigator |
高須 千絵 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(医学域), 講師 (70582823)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
齋藤 裕 徳島大学, 病院, 講師 (50548675)
森根 裕二 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(医学域), 准教授 (60398021)
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Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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Keywords | TME / 癌微小環境癌微小環境 / レンバチニブ |
Outline of Annual Research Achievements |
1) 薬剤耐性肝癌・膵癌細胞株におけるNrf2の役割の解明 1. レンバチニブ耐性肝癌細胞株の確立と特性の確認:肝癌細胞株(PLC, Huh7)を使用。レンバチニブを含む培地で培養し、濃度を徐々に上昇させることにより耐性株を樹立し、耐性株で親株に比し耐性、悪性度が増大している事を確認した。2. Nrf2ノックダウンによる細胞株の特性の変化に関する検討:耐性株が獲得した特性において、Nrf2 pathwayの影響を検討するために、Si-RNAによりNrf2をノックダウンした耐性株を用いて、上記耐性・悪性度上昇がキャンセルされる事を確認した。3.レンバチニブ耐性肝癌細胞株におけるmiRNA発現に関する検討:薬剤耐性肝癌細胞株(PLC, Huh7)で24hr培養によるCancer condition medium(Cancer-CM)から市販のエクソソーム回収kitを用いてmicroRNAを抽出し、Nrf2に関連するmicroRNA-Xを同定した。 2) 薬剤耐性細胞株由来microRNA-XにおけるNrf2 pathwayの検討 薬剤耐性肝癌細胞株(PLC, Huh7)で24hr培養によるCancer condition medium(Cancer-CM)を作成し、肝癌細胞株を作成し、耐性度・悪性度の特性につき下記検討を行い、recipient側でも耐性と悪性度が上昇している事を確認した。 3 ) microRNA-X ノックダウン microRNA-Xをノックダウンする事で、Nrf2の活性が減弱し、耐性と悪性度がキャンセルされる事を確認した。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
耐性株からexosomeを介したrecipient癌細胞への性質伝播につき機序解明を進めている。
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Strategy for Future Research Activity |
Recipient cancer cellによるin vivoにおける検討: Recipient cancer cellを4~5週齢Balb/cヌードマウス背部に皮下注射し異所性モデルを作成。4週間後にsacrificeし、癌進展・転移促進の検討を行い、癌細胞のみを皮下注射した群と比較する。また、ソラフェニブ、レンバチニブ投与による治療抵抗性についても比較検討する。
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