2011 Fiscal Year Annual Research Report
セントロメアとヘトロクロマチンの集合バランスと細胞高次調節機能の解析
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23247030
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| Research Institution | Kazusa DNA Research Institute |
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Principal Investigator |
舛本 寛 公益財団法人かずさDNA研究所, ヒトゲノム研究部, 室長 (70229384)
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| Keywords | 遺伝学 / 染色体 / ヘテロクロマチン / セントロメア / 人工染色体 |
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| Research Abstract |
染色体分配機能に関わるセントロメア領域では、CENP-Aを含むセントロメアクロマチンの集合と共にヘテロクロマチンの集合も起こる。本研究ではこれらクロマチンの集合メカニズム解明を目指して次の解析を進めた。1.多様な細胞でのクロマチン形成バランスの解析:人工染色体前駆体である合成反復DNAをヒトHT1080細胞へ導入すると、CENP-Aクロマチンの集合と共にセントロメア機能を備えた人工染色体の形成が起こるが、HeLaや他の多くの株化細胞では強いヘテロクロマチン(ヒストンH3K9me3修飾等)集合活性が導入DNA上でのCENP-Aクロマチンの集合維持やセントロメア形成を阻害していることを発見した。そこで、tetO/tetR融合タンパク質の系を用いて導入合成DNA上へHAT(ヒストンアセチル化酵素)融合タンパクを結合させ、強いヘテロクロマチン形成活性を抑える実験を行った。その結果、HeLaなどこれまでde novoにセントロメアや人工染色体形成が起こせなかった細胞株でもCENP-Aクロマチンの集合維持と共にセントロメア機能を備えた人工染色体の形成が起こせることを証明し、セントロメア機能形成・維持に於けるクロマチン集合バランスの重要性を明らかにした(Ohzeki et al EMBOJ,2012,特許出願)。2.セントロメア構造形成とヘテロクロマチン構造形成を調節する因子の検索:かずさcDNAライブラリーを利用して、多様なtetR融合タンパクを作製し、tetO合成反復配列からなる人工染色体へ結合させ、セントロメア形成に対して負に調節する因子と正に調節する因子のスクリーニングを進め,多数の調節因子候補を得た。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の計画通り研究は順調に進展しており、その成果の一部は既にいくつかの論文の形にまとまって来ている(Ohzekl et al 2012,Bergman et al 2012,Bergman et al 2011)。特に、Ohzeki et al 2012の成果は,これまで導入DNAから人工染色体形成が起こせなかった細胞でも,その原因を解明して人工染色体をde novoに作り出せる技術として発展させることを可能にするものであり、特許出願を行なった。
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| Strategy for Future Research Activity |
100種を超えるタンパク質の巨大複合体であるセントロメアとヘテロクロマチンの集合メカニズムには不明な点が多く残されたままであるが、最近セントロメアとヘテロクロマチンの集合バランスは細胞老化や分化段階で大きく変動している可能性が示唆され始めた。そこで、本研究計画では、これら集合バランスの調節因子の検索とその因子が実際にゲノム機能の発現にどのように関わるのかについて明らかにする。今後の研究では、1.多様な分化状態にある細胞のセントロメアとヘテロクロマチンの形成バランスの解析を進める。2.セントロメア構造形成とヘテロクロマチン構造形成をそれぞれ調節する因子の検索を更に進め、これら調節因子を用いてセントロメアとヘテロクロマチンの集合バランスを操作した場合に、染色体上のゲノム機能がどのように影響を受け、細胞高次調節機構の異常に繋がるのか、そのメカニズムの解明を目指す。
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