2011 Fiscal Year Research-status Report
腫瘍細胞の休眠化機構を特徴づけるマイクロＲＮＡの同定と機能解析
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23501268
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| Research Institution | Kobe University |
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Principal Investigator |
下野 洋平 神戸大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (90594630)
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| Project Period (FY) |
2011-04-28 – 2014-03-31
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| Keywords | 乳がん / 休眠状態がん細胞 / マイクロＲＮＡ |
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| Research Abstract |
本研究では、ヒトの乳がん組織をより正確に反映するモデルとしてヒト乳がん異種移植マウスを作成し、その原発巣または転移巣から休眠状態にあるがん細胞を分離し解析することを目指している。これらの目的を達成するために、本年度は下記の実験を遂行した。1. ヒト乳がん異種移植マウスの樹立：ヒト乳がん異種移植マウスを作成するために、同意の得られた乳がん患者の手術検体を収集し、マウスの乳腺領域に移植したヒト乳がん異種移植マウスを作成している。現在までに35症例以上を移植し、4系統のヒト乳がん異種移植マウスを作成した。2. ヒト乳がん異種移植マウスにおける転移巣の検索：樹立された異種移植マウスを解析することにより、組織染色やセルソーターにより、肺転移巣におけるがん細胞の同定を行った。 3. セルソーターを用いた微量がん細胞検出法の検討：ヒト乳がん異種移植マウスの肺転移巣に含まれるがん細胞は、通常少量であることから、これらのがん細胞をより正確に検出できる方法について検討を行った。4. 休眠状態がん細胞の検出法の検討：Hoechst 3342やPyronyn Yなどの染色を用いて、がん組織より休眠状態がん細胞を検出する方法について検討した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
神戸大学医学部附属病院の協力により、年間35症例以上のヒト乳がん手術検体を収集し、免疫不全マウスに移植することができた。ヒト乳がん組織は、マウスに生着し腫瘍形成を確認するまでに三か月以上を要するが、現在までに、すでに4系統の異種移植マウスを樹立した。また、セルソーターを用いて、転移巣からがん細胞を分離し、休眠状態がん細胞を解析する手法について検討し、実際にマウスに移植したヒト乳がん組織を用いて解析することが技術的に可能になった。
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| Strategy for Future Research Activity |
樹立されたヒト乳がん異種移植マウスの原発巣および肺転移巣より、休眠状態がん細胞を純度が高い状態で正確に同定することが、今後休眠状態を特徴づけるマイクロＲＮＡを検索し同定するためには必須である。これまでの解析を踏まえ、休眠状態を特徴づけるがん細胞の同定のために、ＤＮＡおよびＲＮＡの量に加え、細胞周期制御に関わるタンパク質の発現量も指標にして、より純度の高い解析を目指すよう計画を変更した。この計画変更に伴い生じた次年度使用額は、分離したがん細胞における細胞周期制御に関わるタンパク質の発現量の検討およびマイクロＲＮＡ発現プロファイルの解析に使用する。さらに、がん細胞株なども活用しながら、セルソーターを用いて休眠状態がん細胞を分離する手法の検証をさらに進める。分離同定された休眠状態がん細胞を用いて、リアルタイムＰＣＲ法などのスクリーニング手法を活用し、マイクロＲＮＡ発現のスクリーニングを行い、休眠状態がん細胞を特徴づけるマイクロＲＮＡの同定を行う。さらに、同定されたマイクロＲＮＡの標的遺伝子の解析、マイクロＲＮＡ発現による細胞周期への影響の解析、およびマイクロＲＮＡを発現発現させたヒト乳がん細胞の腫瘍形成能の評価を行う。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
上述した研究実績を踏まえ、平成２４年度は、休眠状態がん細胞の分離同定およびがん細胞の休眠状態を特徴づけるマイクロＲＮＡの同定を進める。1. 休眠状態がん細胞の分離・同定：樹立されたヒト乳がん異種移植マウスの原発巣および転移巣のがん細胞をセルソーターにて解析し、休眠状態にあるがん細胞を分離・同定する。また、分離された細胞について細胞周期制御に関わるタンパク質の発現量の比較検討を行う。2. 休眠状態がん細胞を特徴づけるマイクロＲＮＡの検索：分離された休眠状態にあるがん細胞とそれ以外のがん細胞におけるマイクロＲＮＡの発現プロファイルを比較することにより、休眠状態がん細胞を特徴づけるマイクロＲＮＡの同定を行う。3. 休眠状態を特徴づけるマイクロＲＮＡの標的遺伝子の検索：ルシフェラーゼアッセイ法などを用いて、同定されたマイクロＲＮＡにより発現が制御される遺伝子の検索を行う。
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