2012 Fiscal Year Research-status Report

腹膜播種病巣制御ためのびまん型胃がん細胞に特異的な遺伝子治療ベクターの開発

Research Project

Project/Area Number	23501322
Research Institution	National Center of Neurology and Psychiatry
Principal Investigator	佐々木博己独立行政法人国立がん研究センター, 研究所, ユニット長 (60235265)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	佐伯宣久独立行政法人国立がん研究センター, 研究所, 主任研究員 (80466200)
Keywords	胃がん
Research Abstract	びまん型胃がんでも強く発現するがん遺伝子候補GSDMB遺伝子に着目し、そのプロモーターをルシフェラーゼレポーターに組み込み、プロモーター活性を調べた。ヒトの腹膜中皮細胞MeT-5Aで活性が弱く、６種のびまん型胃がん細胞株44As3, 58As9, 60As6, HSC44, HSC58, HSC60で活性が強いプロモーターを期待したところ、GSDMBプロモーターが６種のびまん性胃がん細胞株中５株で強い活性を示し、腹膜中皮細胞では基本レポーターべクター程度の活性を示すのみだった。そこで、このGSDMBプロモーターを細胞殺傷用プラスミドベクターに組み込み、細胞死誘導活性を測定したところ、上記プロモーター活性の強い胃がん細胞に高い活性を認めた。同時にHSVtk遺伝子を組み込んだレンチウイルスベクターも準備した。このベクターは、in vivo腹膜再発モデルマウスの抑制試験に使うため、染色体への挿入型を選択した。これは腫瘍内への遺伝子導入が充分でなくとも、バイスタンダード効果によって、染色体に組み込まれていない周囲のがん細胞や、殺傷から逃れた細胞分裂を休止させたがん細胞への効果が期待できる。さらに、特異的プロモーター以外にも強力活性を持つＣＭＶプロモーターに細胞死誘導遺伝子GSDMAを連結させたアデノウイルスベクターを準備し、ウイルス粒子を大量に得た。このウイルスを胃がん細胞に感染させ、in vitroの細胞殺傷効果も確認した。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 平成２４年度の計画では、びまん型胃がんで発現し、腹膜中皮では発現しない遺伝子プロモーターを殺傷ベクターに組み込み、活性をin vitro, in vivoで評価する予定だった。In vivoの検討には、至らなかったが、８０％の達成度と評価したい。
Strategy for Future Research Activity	本年度の検討でも明らかなように、腹膜中皮では発現せず、胃がん細胞でのみ発現するGSDMBプロモーターを殺傷ベクターに組み込みin vitroの効果を確認できた。最終年度には、HSVtk遺伝子を持つウイルスベクターに組み換え、in vivoの評価を行う計画である。一方、ＣＡＧやCMVプロモーターのような強い治療ベクターの評価も必要なことから、CAGプロモーターの付いたアデノウイルスベクターに組み込んだアポトーシス誘導遺伝子GSDMA（当初計画にある）による腹膜再発抑制効果を見る研究も行う。
Expenditure Plans for the Next FY Research Funding	平成２５年度の請求額のうち直接経費は、ほとんど物品費（消耗品費）として使用する計画である。

Research Products

(1 results)

All Journal Article

[Journal Article] Intraperitoneal delivery of a small interfering RNA targeting NEDD1 prolongs the survival of scirrhous gastric cancer model mice.2013
- Author(s)
  116. Fujita T, Yanagihara K, Takeshita F, Aoyagi K, Takigahira M, Chiwaki F, Fukagawa T, Katai H, Ochiya T, Sakamoto H, Konno H, Yoshida T, Sasaki H.
- Journal Title
  
  Cancer Sci.
  
  Volume: 104 Pages: 214-222
- DOI
  10.1111/cas.12054
- Peer Reviewed