シェーグレン症候群モデルマウス唾液腺アクアポリン５の動態とその分子機構の解明

2013 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 23592781
• Research Institution: The Nippon Dental University
• Principal Investigator: 梨田 智子 日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 准教授 (10133464)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 今井 あかね 日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 講師 (60180080) ; 吉江 紀夫 日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 教授 (30095278) ; 下村 浩巳 日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 教授 (40139259)
• Keywords: 耳下腺 / 腺房細胞 / アクアポリン５ / NODマウス / 局在性 / 輸送タンパク質

Research Abstract

以前申請者らが行った研究で，β－アドレナージック刺激後，アクアポリン５はEPI64と同様に挙動することが認められていたので，ERMタンパク質との共存性を調べた。正常マウスにおいて，ERMタンパク質の中でezrinのみが腺房細胞の先端膜に存在しており，その局在性はアクアポリン５と一致していた。糖尿病発病NODマウス耳下腺腺房細胞においてもezrinはアクアポリン５と一致した局在性を示し，両者は基底膜にも広く分布していた。すなわち，アクアポリン５はezrinと共局在し，糖尿病NODマウスでは共に局在性が変化することがわかった。現在，投稿準備中である。
関与する可能性のある輸送タンパク質として，cDNAマイクロアレイ解析からrab6bに焦点をあてた。まず正常マウス耳下腺腺房細胞におけるrab6bの分布を調べた。rab6bは主に低密度の小胞画分に存在していたが，他の複数の画分にも検出された。一方，アクアポリン５は形質膜以外にこの低密度の小胞画分にも検出された。しかし，免疫組織染色像で，アクアポリン５とrab6bの局在は現在まで得られた結果では必ずしも一致せず，さらなる検討が必要である。
また，糖尿病NODマウスにおいて，多くのユビキチン化関連タンパク質の遺伝子発現が減少していたことから，病態とユビキチン化との関係が予想された。そこで，マウス耳下腺ホモジネートの二次元電気泳動後，アクアポリン５抗体を用いたWestern blottingを行い，修飾されたアクアポリン５の出現を調べた。25KDaにおいて，pI 8.81に未修飾のアクアポリン５のバンドが検出され，他にpI7.0およびpI6.0に薄いバンドが検出された。これらのバンドの上方に48KDaのバンドがそれぞれ検出され，これらはリン酸化とユビキチン化によると考えられた。現在，これらのパターンについて病態との比較を行っている。

Research Products

• [Journal Article] MADD/DENN/Rab3GEP functions as a guanine nucleotide exchange factor for Rab27 during granule exocytosis of rat parotid acinar cells. (2013)
  • Author(s): Imai A, Ishida M, Fukuda M, Nashida T, Shimomura H.
  • Journal Title: Arch Biochem Biophys Volume: 536 Pages: 31～37
  • DOI: 10.1016/j.abb.2013.05.002.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Characterization of cysteine string protein in rat parotid acinar cells. (2013)
  • Author(s): Shimomura H, Imai A, Nashida T.
  • Journal Title: Arch Biochem Biophys Volume: 538 Pages: 1～5
  • DOI: 10.1016/j.abb.2013.08.001.
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 小児の齲蝕と遺伝的要因に関する検索 (2014)
  • Author(s): 下村-黒木淳子，梨田智子，坂井幸子，竜佑宗，松田貴絵，関本恒夫
  • Organizer: 第５２回日本小児歯科学会大会
  • Place of Presentation: 品川区立総合区民会館（東京）
  • Year and Date: 20140516-20140517
• [Presentation] ラット耳下腺腺房細胞の開口分泌時におけるRab27のGDP/GTP交換サイクル (2013)
  • Author(s): 今井あかね，石田森衛，吉江紀夫，辻村麻衣子，佐藤律子，梨田 智子，福田光則
  • Organizer: 第58回日本唾液腺学会学術大会
  • Place of Presentation: 文京学院大学 （東京）
  • Year and Date: 20131214-20131214
• [Presentation] 小児における齲蝕と遺伝的要因についての検討 (2013)
  • Author(s): 下村-黒木淳子，竜佑宗，梨田智子
  • Organizer: 第５５回歯科基礎医学会学術大会・総会
  • Place of Presentation: 岡山コンベンションセンター（岡山）
  • Year and Date: 20130920-20130922
• [Presentation] NODマウス耳下腺腺房細胞における抗菌性タンパク質の発現 (2013)
  • Author(s): 梨田智子，吉江紀夫，佐藤律子，今井あかね，下村浩巳
  • Organizer: 第５５回歯科基礎医学会学術大会・総会
  • Place of Presentation: 岡山コンベンションセンター（岡山）
  • Year and Date: 20130920-20130922
• [Presentation] 唾液ヒスタチンmRNAレベルと口腔環境衛生との相関性 (2013)
  • Author(s): 佐藤律子，梨田智子，三上正人，今井あかねral Biosci suppl 2013, 199 (P2-64),2013.
  • Organizer: 第５５回歯科基礎医学会学術大会・総会
  • Place of Presentation: 岡山コンベンションセンター（岡山）
  • Year and Date: 20130920-20130922
• [Presentation] Antibacterial proteins in parotid acinar cells of non-obese diabetic mouse. (2013)
  • Author(s): Nashida T, Yoshie S, Mizuhashi F, Sato R, Imai A, and Shimomura H
  • Organizer: 2nd Meeting of the International Association for Dental Research Asia Pacific Region
  • Place of Presentation: Plaza Athenee （バンコク：タイ）
  • Year and Date: 20130821-20130823
• [Presentation] Relation of mRNA level histatine to oral hygiene. (2013)
  • Author(s): Sato R, Nashida T, Tsutida S, Susuga M, Kikuchi H, Harada S, Sato A, Miyazaki A, Takahashi A, Imai A, Suda T and Shimomura H
  • Organizer: 2nd Meeting of the International Association for Dental Research Asia Pacific Region
  • Place of Presentation: Plaza Athenee （バンコク：タイ）
  • Year and Date: 20130821-20130823