2012 Fiscal Year Research-status Report

細胞極性可視化トランスジェニックマウスを用いた生体内細胞融合の解析

Research Project

Project/Area Number	23659162
Research Institution	Keio University
Principal Investigator	及川司慶應義塾大学, 医学部, 講師 (20457055)
Keywords	細胞極性
Research Abstract	イノシトールリン脂質による極性形成の可視化を個体に応用するために、イノシトールリン脂質結合ドメインを発現するトランスジェニックマウスの作製を行っている。極性可視化に用いるイノシトールリン脂質結合ドメインの持つ潜在的な毒性を考慮に入れ、発現部位と発現時期をコントロールできる、KH2 ES 細胞からマウスを樹立することを試みている。これは目的遺伝子をDNA 組換え酵素Flippase により、染色体の特定の遺伝子座 (ColA1 下流)に1 コピーだけ保持させることができるものである(Hochedlinger K. et al. Cell, 2005)。さらにKH2細胞はRosa26遺伝子の下流に、抗生物質doxycyclinを投与すると活性化する転写因子(rtTA)を持っており、目的遺伝子の発現がdoxycyclinで誘導できる。このアレルをクロスアウトし、細胞系譜特異的にrtTAを発現するマウスと掛け合わせることで、発現組織を特定の細胞系譜または臓器に限定することができる。目的遺伝子を保持するKH2 ES 細胞においては、サザンブロットで目的遺伝子の保持を確認し、さらにmRNA、タンパクの発現チェック及び共焦点顕微鏡による蛍光シグナルの確認も行った。このES細胞をaggregation法で桑実胚に導入し、偽妊娠マウスへ移植し、移植胚由来のマウス（キメラマウス）を得たが、ES細胞由来の目的遺伝子が生殖細胞を通じて次世代に伝えられる個体はまだ得られていない。ES細胞を別なストック由来のものに換えるなどして再度キメラマウスの産生を行っている。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 4: Progress in research has been delayed. Reason 当初の計画では平成２４年度中に目的マウスを得るはずであったが、まだ得られていないため。目的の遺伝子を保持したKH2 ES細胞は得られたものの、これがキメラマウスの生殖細胞とならず、次世代に伝えられる形で目的遺伝子を保持する個体が得られていない。
Strategy for Future Research Activity	KH2 ES細胞はこれまでスペイン国立がんセンターから譲り受けたものを使用していたが、輸送などの影響によりES細胞としての品質に問題が起きている可能性が否定できないため、このES細胞の使用をやめて市販のKH2 ES細胞(オープンバイオシステムズ)を使用することにした。新しいKH2 ES細胞を用い、これまでと同様にマウスを得るべく研究を推進する。
Expenditure Plans for the Next FY Research Funding	トランスジェニックマウス作製に必要な試薬やマウス飼育にかかる費用として、大部分を消耗品費として使用する。