口腔癌の微小環境におけるリンパ管新生機構の解析

2011 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 23792320
• Research Institution: Tokyo Medical and Dental University
• Principal Investigator: 道 泰之 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (70376755)
• Project Period (FY): 2011-04-28 – 2013-03-31
• Keywords: 口腔癌 / 微小環境 / リンパ管新生

Research Abstract

本研究の目的は、口腔癌における重要な予後決定因子である「リンパ行性転移」のメカニズムを明らかにするため、口腔癌の微小環境を口腔癌培養細胞株・リンパ管内皮細胞培養細胞株・ならびにマクロファージ培養細胞株・線維芽細胞株を用いた、共培養細胞システムを構築し、より実臨床に近い培養細胞実験系を確立し、中和抗体やsi-RNA などを用いそのシステムを抑制することで、中心的に作用するタンパクを同定することにある。発展的目的としてそのシステムを応用することで、オーダーメイド医療に資する、リンパ行性転移抑制系構築の基礎を築くことにある。1）当科で樹立した、数種の口腔癌培養細胞株（HSC2.3.4.7）ならびに他の研究者から既に供与され、当科で保管している口腔癌培養細胞株と、培養マクロファージ・線維芽細胞培養株を単独、２種の共培養・３種の共培養を行い、培養上清を得た。その際、共培養に用いる細胞数を癌細胞：線維芽細胞： マクロファージで種々の割合に変更し、腫瘍細胞の増殖の多かったもの、などの条件の検討を行った。2）得られた培養上清をリンパ管内皮細胞培養細胞液に加え、リンパ管新生への影響の違いを定量評価した。（この系では、共培養系細胞内のタンパク発現に関する影響は評価出来ない）４）各共培養系の組み合わせにより生じた、細胞内に含まれる炎症性サイトカインと、VEGF-A,-C,-D などのリンパ管新生因子のmRNA 量の違いについてリアルタイムPCR 法を用い、定量評価を行った。4）培養上清のVEGF-A・CをELISA 法を用い、タンパクレベルの発現量を定量評価した。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

培養細胞株については順調に進展している。臨床検体については、培養細胞株の実験結果を踏まえて行うので、準備段階にある。

Strategy for Future Research Activity

培養細胞系の確認実験を早期に完了させ、臨床検体を用いた実験に速やかに移行するよう推進する。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

平成23年度の研究にかかわる消耗品と同様の使用のほか、臨床検体に関する免疫染色にかかわる抗体ならびにSi実験にかかるRNA合成費用などが見込まれる。