2014 Fiscal Year Annual Research Report
新規抗糖鎖抗体を用いた慢性炎症性疾患における糖鎖の機能解明
| Project/Area Number |
24390018
|
|---|
| Research Institution | Hoshi University |
|---|
Principal Investigator |
川島 博人 星薬科大学, 薬学部, 教授 (50260336)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
今井 康之 静岡県立大学, 薬学部, 教授 (80160034)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2016-03-31
|
| Keywords | リンパ球ホーミング / 糖鎖 / 抗糖鎖抗体 / シアリルルイスX / L-セレクチン / E-セレクチン / P-セレクチン / 炎症 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、独自に開発した方法論により新規抗フコシル化糖鎖抗体を樹立するとともに、同抗体をプローブとして用いて慢性炎症性疾患における糖鎖の機能を解明することを目的とする。はじめに、フコース転移酵素Fuc-TVII、硫酸基転移酵素GlcNAc6ST-2、O-型糖鎖のコア構造を合成する糖転移酵素Core1β3GlcNAcTおよびCore2GlcNAcT、およびコアタンパク質CD34をコードする遺伝子の全てを安定発現する多重遺伝子発現株でフコース転移酵素Fuc-TIV/Fuc-TVIIダブルノックアウトマウス(DKOマウス)を免疫することにより、フコシル化糖鎖の一種であるシアリルルイスXに特異的に結合する新規モノクローナル抗体を樹立した。樹立した抗体の結合特異性は、多価糖鎖プローブを用いたELISA、糖鎖アレイ解析、糖鎖合成酵素遺伝子導入株への反応性の解析および各種糖転移酵素欠損マウス由来組織切片に対する染色性の解析をもとに決定した。シアリルルイスX糖鎖抗原は、炎症血管上のP-セレクチン、E-セレクチンのリガンドとして働く糖鎖構造として知られている。そこでさらに生体顕微鏡を用いて生きたマウスの耳介の炎症血管内皮細胞表面における白血球ローリングに対する新規抗シアリルルイスX抗体の作用を検討した。その結果、同抗体はP-セレクチン、E-セレクチン依存性の白血球ローリングを強く抑制することが明らかとなった。白血球集団特異的なマーカー抗体との2重染色を行い、フローサイトメトリーにより解析した結果、炎症巣に浸潤する好中球および単球はシアリルルイスX糖鎖抗原を高発現することが確認された。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
おおむね当初の研究計画通りに研究が進展し、新規抗シアリルルイスX糖鎖抗体の樹立に成功し、その生物学的活性の評価に成功したため。
|
| Strategy for Future Research Activity |
慢性炎症性疾患モデルの一種であるシリカ誘発性肺炎症モデルを用いて、樹立に成功した新規抗糖鎖抗体が慢性炎症抑制効果を示すか否かを解析する。
|
| Causes of Carryover |
同一性能の物品の場合なるべく安価なものを購入するなどの経費節減努力により、基金助成金のうち一部を次年度使用額として確保することができた。
|
| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度は、この研究費を用いてシリカ誘発性肺炎症モデルを用いた解析を遂行する予定である。
|
