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2012 Fiscal Year Annual Research Report

乳癌進展における微小環境シグナリングのリン酸化プロテオミクス解析と組織での可視化

Research Project

Project/Area Number 24390087
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (B)

Research InstitutionMie University

Principal Investigator

吉田 利通  三重大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (80166959)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 紅林 淳一  川崎医科大学, 医学部, 准教授 (10248255)
田中 典子 (花村 典子)  三重大学, 医学部附属病院, 講師 (60437100)
小塚 祐司  三重大学, 医学部附属病院, 講師 (50378311)
下條 尚志  三重大学, 医学部, 技術員 (70410751)
Project Period (FY) 2012-04-01 – 2015-03-31
Keywords乳癌 / 癌進展 / 微小環境 / プロテオミクス / リン酸化
Research Abstract

本研究では、増殖因子・細胞外マトリックスなどで構成される癌組織内の微小環境からのチロシン(Tyr)リン酸化シグナルを対象として、実際の乳癌組織と培養細胞モデルのリン酸化タンパクとその部位を、リン酸化プロテオミクスの手法で比較する。これにより、リン酸化部位特異抗体による免疫組織化学研究に科学的な根拠を与える。プロテオミクス解析で関与シグナル分子とTyrリン酸化部位を網羅的に同定することにより、癌浸潤などの機構を研究するために有用な新規のリン酸化部位とその特異抗体を提供する。また、癌幹細胞のシグナルについてもプロテオミクス解析で検討する。これらの目的を達成するために、1)ヒト乳癌組織内のTyrリン酸化のプロテオミクス解析、2)微小環境を再構成した培養細胞を用いたTyrリン酸化と細胞機能との関連、3)ヒト乳癌組織内でのTyrリン酸化シグナルの免疫組織化学による解析、4)Tyrリン酸化と癌幹細胞との関連の解析を行っている。24年度では、1)10例のヒト乳癌組織から、正常部、癌境界部、癌中心部をそれぞれ採取し、タンパク試料を採取した。この試料のプロテオミクス解析に先んじて、2)の培養細胞サンプルのプロテオミクス解析を行い、細胞外マトリックスタンパクTenascin-C(TNC)とTGF-β1の添加がSRCとFAKのリン酸化を亢進させることを2D-WBで確認した。リン酸化チロシン抗体によるWBでも処理前後で差異が見られたものの顕著ではなく、検出が困難であることが示唆された。
3}では1)で採取された組織を特殊な固定液を用いることにより、すくなくともFAK925の癌細胞での意味があると考えられる染色像を検出でき、他の抗体でも可能性がある染色像が観察できた。4)では、MDA-MB-231乳癌細胞株へのTNC+TGF-β1添加により、乳癌幹細胞の分画が2倍に増加することが明らかとなった。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

タンパクの2DゲルおよびそのWestern blotの解析は出来ているが、はっきりとした差異を示すスポットの確定およびその微量なタンパクのマススペクトロメトリーを行い検出するのがかなり困難であることがわかった。また、微量な検出を行う最新のマススペクトロメトリーの装置の本格的な稼動が遅れている。

Strategy for Future Research Activity

上記の理由により、マススペクトロメトリー解析に遅延が生じた。リン酸化については180ヶ所のリン酸化部位およびタンパクを直接かつ網羅的に検出するRPPA法によっても解析を始める。この方法では、TyrのみならずSer,Thrのリン酸化も検出可能である。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

RPPA法を委託するためおよび検出されたリン酸化部位の抗体での解析を増やす必要があり、それに対して今年度分の直接経費の繰越分を用いる。

  • Research Products

    (27 results)

All 2013 2012 Other

All Journal Article (10 results) (of which Peer Reviewed: 7 results) Presentation (15 results) Book (1 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Matricellular protein : a new player in cerebral vasospasm following subarachnoid hemorrhage2013

    • Author(s)
      Suzuki H, Shiba M, Fujimoto M, Kawamura K, Nanpei M, Tekeuchi E, Matsushima S, Kanamaru K. Imanaka-Yoshida K, Yoshida T, Taki W.
    • Journal Title

      Acta Neurochir Suppl.

      Volume: 115 Pages: 213-8

    • DOI

      10.1007/978-3-7091-1192-5_39.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] 【Matricellularタンパク】テネイシン-C2013

    • Author(s)
      下條 尚志、橋詰 令太郎, 今中 恭子[吉田], 吉田 利通
    • Journal Title

      臨床化学

      Volume: 42 Pages: 5-12

  • [Journal Article] Intratumoral Estrogen Concentration and Expression of Estrogen -Induced Genes in Male Breast Carcinoma : Comparison with Female Breast Carcinoma2013

    • Author(s)
      Takagi K, et al.
    • Journal Title

      Hormones and Cancer

      Volume: 4 Pages: 1-11

    • DOI

      10.1007/s12672-012-0126-6.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] トリプルネガティブ乳癌の治療戦略2012

    • Author(s)
      紅林淳一
    • Journal Title

      内分泌甲状腺外科学会雑誌

      Volume: 29 Pages: 293-297

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Antitumor and anticancer stem cell activity of a poly ADP-ribose polymerase inhibitor olaparib in breast cancer cells2012

    • Author(s)
      Shimo T, Kozuka Y, et.al
    • Journal Title

      Breast cancer

      Volume: 28 March(Epub ahead of print)

    • DOI

      10.1007/s12282-012-0356-z

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] 広範囲切除を必要といたAC領域乳癌に対しB-plasty応用の乳房温存手術を施行した1例2012

    • Author(s)
      小川朋子、花村典子、他
    • Journal Title

      乳癌の臨床

      Volume: 27 Pages: 745-749

  • [Journal Article] 診断治療の工夫 腫瘍直上皮膚切除を必要とする乳房温存術における皮膚切開の工夫2012

    • Author(s)
      小川朋子、花村典子、他
    • Journal Title

      乳癌の臨床

      Volume: 27 Pages: 649-653

  • [Journal Article] Tenascin-C induces prolonged constriction of cerebral arteries in rats

    • Author(s)
      Fujimoto M, Suzuki H, Shiba M, Shimojo N, Imanaka-Yoshida K, Yoshida T, Kanamaru K, Matsushima S, Taki W.
    • Journal Title

      Neurobiol Dis.

      Volume: (印刷中)

    • DOI

      10.1016/j.nbd.2013.01.007.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Atrial natriuretic peptide exerts protective action against angiotensin II-induced cardiac remodeling by attenuating inflammation via endothelin-1/endothelin receptor A cascade

    • Author(s)
      Fujita S, Shimojo N, Terasaki F, Otsuka K, Hosotani N, Kohda Y, Tanaka T, Nishioka T, Yoshida T, Hiroe M, Kitaura Y, Ishizaka N, Imanaka-Yoshida K.
    • Journal Title

      Heart Vessels.

      Volume: (印刷中)

    • DOI

      10.1007/s00380-012-0311-O

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Marked lymphovascular invasion, progesterone receptor negativity and high Ki67 labeling index predict a poor outcome in breast cancer patients treated with endocrine therapy alone

    • Author(s)
      Kurebayashi J, et al.
    • Journal Title

      Breast Cancer

      Volume: (印刷中)

    • DOI

      10.1007/s12282-012-0380-z

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Prognostic factors in HER2-positive breast cancer patients treated with adjuvant trastuzumab and chemotherapy2013

    • Author(s)
      Kurebayashi j, et al.
    • Organizer
      The 12^<th> St. Gallen Breast Cancer Conference
    • Place of Presentation
      St. Gallen, Switzerland
    • Year and Date
      2013-03-14
  • [Presentation] Effects of antiestrogens on the cell growth and regulation of cancer stem cell population in breast cancer cells2013

    • Author(s)
      Yamashita T, et al.
    • Organizer
      The 12^<th> St. Gallen Breast Cancer Conference
    • Place of Presentation
      St. Gallen, Switzerland
    • Year and Date
      2013-03-14
  • [Presentation] 術前組織が非浸潤癌の症例に対するセンチネルリンパ節生検の適応2012

    • Author(s)
      伊藤みのり、花村典子, 他
    • Organizer
      日本臨床外科学会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      20121100
  • [Presentation] 整容性を高める乳房手術とその長期成績 下部領域乳癌に対する乳房温存手術の長期成績とその術式選択2012

    • Author(s)
      山下雅子、花村典子, 他
    • Organizer
      日本臨床外科学会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      20121100
  • [Presentation] 当院における35歳以下乳癌症例についての検討2012

    • Author(s)
      柏倉由実、花村典子, 他
    • Organizer
      日本乳癌検診学会
    • Place of Presentation
      沖縄
    • Year and Date
      20121100
  • [Presentation] 乳房縮小術を応用したoncoplasic surgery2012

    • Author(s)
      花村典子
    • Organizer
      日本乳癌学会
    • Place of Presentation
      熊本
    • Year and Date
      20120600
  • [Presentation] 乳癌手術における整容性の追求 乳房下溝線部脂肪筋膜弁による再建法2012

    • Author(s)
      山下雅子、花村典子, 他
    • Organizer
      日本乳癌学会
    • Place of Presentation
      熊本
    • Year and Date
      20120600
  • [Presentation] 良悪性の鑑別が困難であった8cm大の嚢胞内腫瘤として描出された乳管内乳頭腫の一例2012

    • Author(s)
      野呂綾, 小塚祐司, 他
    • Organizer
      第74回日本臨床外科学会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2012-11-30
  • [Presentation] 多発小嚢胞像を示したTisの検討2012

    • Author(s)
      野原有起, 小塚祐司、花村典子, 他
    • Organizer
      第22回日本乳癌検診学会
    • Place of Presentation
      那覇
    • Year and Date
      2012-11-09
  • [Presentation] DCIS診断を向上させるために 当院診断症例の検討2012

    • Author(s)
      柏倉由実, 小塚祐司、花村典子, 他
    • Organizer
      第20回日本乳癌学会総会
    • Place of Presentation
      熊本
    • Year and Date
      2012-06-29
  • [Presentation] 乳癌幹細胞の制御を指標とした新しい治療戦略2012

    • Author(s)
      紅林淳, 他
    • Organizer
      第20回日本乳癌学会学術総会
    • Place of Presentation
      熊本(招待講演)
    • Year and Date
      2012-06-28
  • [Presentation] トリプルネガティブ乳癌の治療戦略2012

    • Author(s)
      紅林淳一
    • Organizer
      第24回日本内分泌外科学会総会
    • Place of Presentation
      名古屋(招待講演)
    • Year and Date
      2012-06-09
  • [Presentation] テネイシン-Cの創る乳癌浸潤の微小環境2012

    • Author(s)
      吉田 利通
    • Organizer
      第101回日本病理学会(座長)
    • Place of Presentation
      東京(招待講演)
    • Year and Date
      2012-04-26
  • [Presentation] トリプルネガティブ乳癌のバイオロジー2012

    • Author(s)
      紅林淳一
    • Organizer
      第28回日本乳腺甲状腺超音波診断会議
    • Place of Presentation
      岡山(招待講演)
    • Year and Date
      2012-04-22
  • [Presentation] 乳癌のサブタイプ分類と個別化治療2012

    • Author(s)
      紅林淳一、園尾博司
    • Organizer
      第112回日本外科学会定期学術集会
    • Place of Presentation
      幕張(招待講演)
    • Year and Date
      2012-04-11
  • [Book] これからの乳癌診療2012-20132013

    • Author(s)
      紅林淳一
    • Publisher
      金原出版株式会社(in press)
  • [Remarks]

    • URL

      http://www.medic.mie-u.ac.jp/organization/course/pathol_matrix/

URL: 

Published: 2014-07-16  

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