リンパ球性漏斗下垂体後葉炎の新規病因自己抗原候補７６ｋＤ蛋白の病態への関与

2014 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 24591360
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 椙村 益久 名古屋大学, 医学部附属病院, 講師 (50456670)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 大磯 ユタカ 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (40203707)
• Project Period (FY): 2012-04-01 – 2015-03-31
• Keywords: リンパ球性漏斗下垂体後葉 炎モデル / ES-AVPニューロン

Outline of Annual Research Achievements

リンパ球性漏斗下垂体後葉炎モデルの作成
コムギ胚芽を用いた無細胞翻訳系で、合成したリコンビナント76kD蛋白とcomplete Freund’s adjuvant (CFA)とを混合しエマルジョンを作成しSJL/Jマウスに投与しリコンビナント76kD蛋白免疫動物を作成した。約１４日後に採血しELISA法で76kD蛋白抗体価が上昇していることを確認した。抗76kD蛋白抗体産生Ｂ細胞ハイブリドーマを作出した。マウスを安楽死させ採血とともに下垂体組織を摘出し、切片標本を作製した。下垂体炎組織の免疫組織化学的検討を行い、有意な所見を得ることができた。

ES-AVPニューロンの分化誘導
マウスES細胞よりSFEBq/gfCDM法を用い、ES-AVP細胞を含む視床下部前駆細胞を選択的に分化誘導し、分散培養も行った。その培養系で、遺伝子導入による76kD蛋白の過剰発現や、siRNAによるノックダウン実験に成功した。さらにES-AVP細胞でのAVP小胞に蛍光タンパク質を融合させ、time lapseイメージングでAVP小胞の可視化に成功した。また、全反射蛍光顕微鏡を用いた開口放出解析も可能になり、76kD蛋白の過剰発現や、siRNAによるノックダウンのよるAVP小胞のトラフィキング、開口放出への影響を検討した。また、タンパク質間相互作用をPull-Down Assay、免疫沈降法で解析し76kD蛋白と相互作用する蛋白も同定できた。また、76kD蛋白ノックダウンのAVP分泌に対する影響を検討した。

Research Products

• [Journal Article] Identification of the novel autoantigen candidate Rab GDP dissociation inhibitor alpha in isolated adrenocorticotropin deficiency. (2015)
  • Author(s): Kiyota A, Iwama S, Sugimura Y, Takeuchi S, Takagi H, Iwata N, Nakashima K, Suzuki H, Nishioka T, Kato T, Enomoto A, Arima H, Kaibuchi K, Oiso Y
  • Journal Title: Endocr J Volume: 62 Pages: 153-160
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant