2013 Fiscal Year Annual Research Report
オートファジーに着眼したウエストナイル脳脊髄炎の発症機構の解明
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24880002
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
小林 進太郎 北海道大学, 人獣共通感染症リサーチセンター, 博士研究員 (00634205)
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| Project Period (FY) |
2012-08-31 – 2014-03-31
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| Keywords | ウイルス / オートファジー / 脳炎 / 獣医学 |
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| Research Abstract |
神経細胞に病原性を有するウエストナイルウイルスは細胞内タンパク質分解系の一つであるオートファジーを抑制する。オートファジーの低下は神経細胞死を誘導することが知られており、ウエストナイルウイルス感染によるオートファジー抑制機構を解明することを目的としている。
ウエストナイルウイルスゲノムがコードする10個の遺伝子について、それぞれの塩基配列を哺乳類細胞発現ベクターにクローニングした。構築したウイルスタンパク質発現プラスミドを神経系由来細胞に導入し、オートファジーマーカーであるLC3-IIの発現をイムノブロットおよび、免疫細胞化学染色で評価している。また、変異体ウエストナイルウイルスを作出するために、米国ペンシルバニア大学のDoms教授から供与して頂いた956株のウイルスゲノムをコードしているプラスミドを鋳型として、NY99 6-LP株のウイルスゲノムに組換えたプラスミドを作製している。
本年度はオートファジーに必須な因子であるATG5を欠損した細胞を用いて、オートファジーがウエストナイルウイルスの増殖に与える影響を調べた。その結果、オートファジーはウイルス感染後3-6時間で誘導され、ウイルスゲノムの複製および遺伝子発現を抑制することを見出した。これらの結果をまとめて英文雑誌Virus Researchに投稿し、現在revise中である。さらにオートファジーとウエストナイルウイルスの増殖性および神経病原性の関係を明らかにするために、理化学研究所より神経細胞特異的ATG5ノックアウトマウスを購入し、飼育・繁殖中である。必要な数のマウスを得られ次第、感染実験を実施する予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Reason
25年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
25年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Journal Article] Cysteine residues in the major capsid protein, Vp1, of the JC virus are important for protein stability and oligomer formation.2013
Author(s)
Kobayashi S, Suzuki T, Igarashi M, Orba Y, Ohtake N, Nagakawa K, Niikura K, Kimura T, Kasamatsu H, Sawa H
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Journal Title
PLoS One
Volume: 8
Pages: e76668
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Gold nanoparticles as a vaccine platform: influence of size and shape on immunological responses in vitro and in vivo2013
Author(s)
Niikura K, Matsunaga T, Suzuki T, Kobayashi S, Yamaguchi H, Orba Y, Kawaguchi A, Hasegawa H, Kajino K, Ninomiya T, Ijiro K, Sawa H
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Journal Title
ACS Nano
Volume: 7
Pages: 3926-3938
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Identification of a novel polyomavirus from vervet monkeys in Zambia2013
Author(s)
Yamaguchi H, Kobayashi S, Ishii A, Ogawa H, Nakamura I, Moonga L, Hang'ombe BM, Mweene AS, Thomas Y, Kimura T, Sawa H, Orba Y
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Journal Title
Journal of General Virology
Volume: 94
Pages: 1357-1364
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Autophagy inhibits West Nile virus replication2014
Author(s)
Shintaro Kobayashi, Yasuko Orba, Hiroki Yamaguchi, Kenta Takahashi, Michihito Sasaki, Rie Hasebe, Takashi Kimura, Hirofumi Sawa
Organizer
Asian-African Research Forum on Emerging and Reemerging Infections 2014
Place of Presentation
仙台国際センター（仙台市）
Year and Date
20140120-20140122
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