2017 Fiscal Year Annual Research Report
Dynamics of Molecular Pattern Recognition in Protein Interaction
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25220205
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
浜窪 隆雄 東京大学, 先端科学技術研究センター, 教授 (90198797)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
堀内 恵子 東京大学, 先端科学技術研究センター, 助教 (00456203)
太期 健二 東京大学, 先端科学技術研究センター, 特任助教 (20466866) [Withdrawn]
川村 猛 東京大学, アイソトープ総合センター, 准教授 (70306835)
篠田 恵子 東京大学, 先端科学技術研究センター, 特任助教 (80646951)
津本 浩平 東京大学, 大学院工学系研究科(工学部), 教授 (90271866)
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| Project Period (FY) |
2013-05-31 – 2018-03-31
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| Keywords | 自然免疫 / パターン認識受容体 / RNAプロセッシング / オルタナティブスプライシング / 血管内皮細胞 / 敗血症 / ヒストン / 細胞周期 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ⅰ）PTX3の分子認識機構と自然免疫：ヒストンとPTX3の凝集反応（およびHUVEC細胞障害）について、N端ペプチドで凝集しやすい箇所を同定した。拡張β構造を想定し、構造予測によるアミノ酸変異をいれたペプチドを作成し、変異アミノ酸配列の候補を数種同定した。また同変異アミノ酸ペプチドを用いたMDシミュレーションをおこなった。２０アミノ酸残基程度でヒストンの凝集を起こすことができるペプチドを見出した。ヒストンの細胞障害活性について候補部位を特定し、ヒストンの塩基性とは関係がないこと、ヒストンフォールドとの関係が示唆されることなどを見出した。PTX3ノックアウトマウスを用いて、凝集阻害抗体の抗イディオタイプ抗体の取得とヒストン傷害活性を調べた。川崎病重症例と血中PTX3濃度との関連性を見出し、学会報告した。ヒストンのHUVEC障害の際に放出されるマイクロベジクルの特異抗体を用いたFACSによる測定法を確立し報告した。
ⅱ）RNAプロセッシングと細胞周期および細胞分化とのかかわり：昨年度までに得たWTAP阻害低分子ヒット化合物を基に、候補３０化合物を絞り込み、スプライシングターゲット遺伝子のPCRによるオルタナティブスプライシング変化を評価した。差が認められたものについて、アデノシンメチル化および複合体変化について培養細胞を用いて検討したところ、ヒット化合物について、WTAPノックダウンによる効果と比べて有意の変化を認めた。複合体構成タンパク質のうち、最重要と考えられるタンパク質について、細胞発現系によるアッセイと同時に、精製タンパク質による結合アッセイ系の樹立に成功した。これによりVitroでのスクリーニングが可能となった。さらに、RNAデータ処理により、新たにWTAPが関与するオルタナティブスプライシングに典型的なスプライシング変異を持つ新規の遺伝子を数種同定した。
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| Research Progress Status |
29年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
29年度が最終年度であるため、記入しない。
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Research Products
(10 results)
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[Presentation] Increased levels of plasma pentraxin 3 predict IVIG resistance and coronary artery lesion formation in patients with Kawasaki disease2017
Author(s)
:Kitoh, T (Kitoh, Toshiyuki; Baba, R (Baba, Reizo) ; Kitagawa, Y (Kitagawa, Yoshiro) ; Muto, T (Muto, Taichiro) ; Okumura, A (Okumura, Akihisa) ; Kume, N (Kume, Noriaki; Hamakubo, T (Hamakubo, Takao)
Organizer
EAP2017 Congress and MasterCourse
Int'l Joint Research
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[Presentation] INCREASED LEVELS OF PLASMA PENTRAXIN 3 PREDICT IVIG RESISTANCE AND CORONARY ARTERY LESION FORMATION IN PATIENTS WITH KAWASAKI DISEASE2017
Author(s)
:Kitoh, T (Kitoh, Toshiyuki ; Kitagawa, Y (Kitagawa, Yoshiro) ; Baba, R (Baba, Reizo); Kaneko, A (Kaneko, Atsushi) ; Hayakawa, T (Hayakawa, Tomohito) ; Muto, T (Muto, Taichiro); Okumura, A (Okumura, Akihisa[ ; Murotani, K (Murotani, Kenta) ; Kume, N (Kume, Noriaki) ; Hamakubo, T (Hamakubo, Takao)
Organizer
18th International Vasculitis and ANCA Workshop
Int'l Joint Research
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