2015 Fiscal Year Annual Research Report
乳歯歯髄由来ヒトiPS細胞からの歯形成細胞への分化誘導制御
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25293418
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
齊藤 一誠 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (90404540)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山崎 要一 鹿児島大学, 歯学部, 教授 (30200645)
佐藤 正宏 鹿児島大学, 医療ミニブタ先端医療開発研究センター, 教授 (30287099)
齊藤 陽子 新潟大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (30404487)
稲田 絵美 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 助教 (30448568)
松山 清 久留米工業高等専門学校, 生物応用化学科, 准教授 (40299540)
野口 洋文 琉球大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (50378733)
大島 勇人 新潟大学, 医歯学系, 教授 (70251824)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 小児歯科学 / 再生歯学 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Lymphoid enhancer factor-1 (LEF1) はWnt/Beta-cateninシグナルの調節因子で、Beta-cateninの核内移行で活性化され、幹細胞増殖を含む多くの生物学的な事象に重要な役割を果たしている。過去の研究では、Lef1遺伝子欠損で歯の発生の停止、前象牙芽細胞・前エナメル芽細胞でのLef1発現、Lef1による象牙質シアロリンタンパク質発現の調節を通した象牙芽細胞分化に鍵となる役割を果たすことが示唆されている。
本研究の現在までの成果は、１）乳歯歯髄細胞由来iPS細胞を安定的に樹立するための検討を行い、２）樹立した乳歯歯髄細胞由来iPD細胞に遺伝子導入が可能かどうかの検討を行い、piggyBac transposon システムにより、ゲノムへの挿入による安定発現細胞株の樹立が可能であることを明らかにした。さらに、３）ヒトLEF1プロモーターを用いた遺伝子工学技術により、ヒト乳歯歯髄細胞からLEF1陽性細胞を単離した。このLEF1陽性細胞を、RT-PCR解析により、幹細胞特異的な遺伝子発現を認めた。また、LEF-1陽性細胞を分化誘導培地で培養することにより、骨芽細胞や神経細胞分化が誘導され、このLEF1陽性細胞は多分化能を有していた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
LEF1プロモーターを用いた遺伝子工学技術により、ヒト乳歯歯髄細胞からLEF1陽性細胞を単離することができた。このLEF1陽性細胞は、OCT3/4、SOX2、REX1、NANOGを含む幹細胞特異的な遺伝子発現を認めた。また、LEF-1陽性細胞を分化誘導培地で培養することにより、骨芽細胞や神経細胞分化誘導が可能であり、多分化能を有していることが明らかとなった。
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| Strategy for Future Research Activity |
ヒト乳歯歯髄細胞からLEF1陽性細胞を単離することができたため、現在、乳歯歯髄細胞由来iSP細胞から分化誘導を行い、LEF1陽性細胞の単離を行っている。すでにin vitroにて当該細胞の樹立が確認できている。そのため、iSP細胞由来LEF1陽性細胞とすでに樹立している乳歯歯髄由来LEF1陽性細胞の違いなどの検討を行っていく予定である。
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[Journal Article] Choice of feeders is important for the preparation of iPS cells from primarily cultured human deciduous tooth dental pulp cells2015
Author(s)
Issei Saitoh, Emi Inada, Yoko Iwase, Hirofumi Noguchi, Tomoya Murakami, Miki Soda, Naoko Kubota, Hiroko Hasegawa, Eri Akasaka, Yuko Matsumoto, Kyoko Oka, Youichi Yamasaki, Haruaki Hayasaki, Masahiro Sato
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Journal Title
Cell Medicine
Volume: 8
Pages: 9-23
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Presentation] ALP as a reliable marker for predicting early reprogramming2016
Author(s)
Miki Soda, Issei Saitoh, Emi Inada, Tomoya Murakami, Ayako Suzuki, Tadashi Sawami, Akiko Kagoshima, Yoko Iwase, Yutaka Terao, Hayato Ohshima, Haruaki Hayasaki, Masahiro Sato
Organizer
45rd Annual Meeting & Exhibition of the AADR/ 40h Annual Meeting of the CADR
Place of Presentation
Los Angeles (USA)
Year and Date
2016-03-16 – 2016-03-19
Int'l Joint Research
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