2016 Fiscal Year Annual Research Report
Analysis of DNA-damage-tolerance mechanisms that facilitate restart of stalled DNA replication
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25340030
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
茂木 章 京都大学, 医学研究科, 助教 (80452332)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | DNA損傷トレランス / 複製後修復 / 組換え修復 / ユビキチン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究ではDNA損傷トレランスへの関与が示唆されているユビキチンリガーゼSHPRHと主要なDNA修復経路の中心因子との二重変異株、及びヘリカーゼZRANB3遺伝子破壊細胞株の作製・機能解析を行った。その結果、DNA損傷トレランスへの関与が示唆されているユビキチンリガーゼSHPRHの変異はDNA鎖間架橋損傷(ICLs)の主要な修復経路であるファンコニ貧血(FA)経路の中心因子FANCCの変異によるシスプラチン(DNA架橋剤)感受性を大幅に回復させ、SHPRH依存経路はFA経路と拮抗する可能性が示唆された。また、FANCC単独変異で完全に消失する標的組換えがSHPRH /FANCC二重変異株で顕著に回復することから、SHPRH依存経路は相同組換え修復経路に対して抑制的に働くことが明らかになった。ZRANB3単独変異株はγ線やシスプラチンなど主要なDNA損傷に対して野生株に対して有為な感受性増強を認めなかった。
また、ポリ(ADP-リボシル)化(PAR化)酵素PARP-1のDNAの二本鎖切断(DSBs)末端に対する作用をin vitro細胞抽出液を用いて解析した。その結果、PARP-1はDSB末端のCtIPヌクレアーゼによるresectionを抑制することが明らかになった。さらにCtIPの乳がんにおける作用を検討し、CtIPの低発現は乳がんの予後不良、PARP阻害剤の高感受性に相関することを明らかにした。
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