2015 Fiscal Year Annual Research Report
癌原性口腔細菌によるヒト上皮AID発現誘導とp53遺伝子変異の解析
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25462871
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| Research Institution | Iwate Medical University |
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Principal Investigator |
佐々木 実 岩手医科大学, 歯学部, 准教授 (40187133)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | S. anginosus / AID / 口腔癌 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
S. anginosus の口腔癌発症機序の解明を目的として，S. anginosus菌由来生理活性物質であるSAAによる歯肉上皮細胞からの長期刺激によるAIDタンパク質発現，およびS. anginosus菌由来生理活性物質であるSAA遺伝子のクローニングデータをもとにSAAの組替えタンパク質の発現について検討した．その結果ヒト歯肉上皮細胞をSAAで刺激72時間後まで認められなかったAIDタンパク質は，2週間から4週間持続的に刺激することで発現誘導が認められた．すなわち，歯肉上皮細胞に対するAID遺伝子発現はコントロールの2倍程度で，短期のSAA刺激ではタンパク質の発現は非常に弱いと考えられる．しかし，長期にわたる刺激ではAIDタンパク質の発現が誘導されることが明らかとなった．さらに，S. anginosus菌由来生理活性物質SAAの組替えタンパク質の発現については， pGEXベクターGST融合蛋白質あるいはHisタグタンパク質の両タンパク質の発現系を用いて検討した．その結果，pGEXベクターにSAA遺伝子を組み込みGSTおよびHisタグリコンビナントSAA（rSAA）を発現することができた．この際，ホストにclean coliを用いることにより発現タンパク質サンプル中に大腸菌由来LPSの持ち込みを排除した．次にこの精製rSAAを用いて，これまで行って来たネイティブSAA（nSAA）によるマクロファージ刺激による一酸化窒素（NO）産生ならびにiNOS遺伝子誘導について検討した．nSAA同様rSAAでもマウス腹腔マクロファージおよびマクロファージ様細胞株J774に対してNO誘導活性が認められた．以上の成績より， S. anginosusはその生理活性物質SAAによりAID異所性発現誘導による上皮細胞への変異誘導およびNO産生などの炎症応答を惹起し，S. anginosus の口腔癌発症機序に深く関与していることが示唆された．
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