TRPA1チャネル阻害剤を応用した薬物性歯肉増殖症の治療薬の開発

2015 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 25463180
• Research Institution: The University of Tokushima
• Principal Investigator: 中川 弘 徳島大学, 大学病院, 講師 (70192218)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 松本 文博 徳島大学, 大学病院, 講師 (70229566) ; 北村 尚正 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部, 助教 (50614020) ; 山本 愛美 徳島大学, 大学病院, 医員 (10630171) [Withdrawn] ; 上田 公子 (山口公子) 徳島大学, 大学病院, 助教 (40335807)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: 歯肉増殖症 / フェニトイン / ｐ－HPPH / TRPA1 / メンソール / カンファ―， / シネオール

Outline of Annual Research Achievements

われわれは，Phenytoin（PHT）の代謝産物5-(p-hydroxyphenyl)-5-phenylhydantoin (p-HPPH)がヒト正常歯肉線維芽細胞（HGF）に及ぼす影響について検討を行い，p-HPPH投与により，コラーゲン分解酵素であるMMP-1 mRNAの発現量が有意に低下していることを明らかにした．本年度は，TRPA1チャネル阻害剤がp-HPPHによるMMP-1 mRNAの発現量の低下を抑制するかどうかを検討した．さらに，TRPA1チャネル阻害作用のある植物由来の成分（メンソール，カンファ―，シネオール）の効果についても調査した．
【材料】実験群には培養液に，p-HPPH（20μg/ml）を添加し，対照群には実験群と等量のp-HPPHと阻害剤(100μM）を添加した．
【実験方法】各群の培地で１日間培養したHGFを採取し，TrIsol (Invitrogen)を使用して，totalRNAを抽出し，抽出したRNAから，MMP-1の mRNA の発現量を測定した．検出はTaKaRa SYBR Premix Ex TaqⅡ（タカラバイオ）によるリアルタイム２Step RT-PCR反応により行った．各群のmRNAのレベルは，GAPDHを用いて標準化し，比較Ct法による定量を行った．
【結果】①TRPA1チャネル阻害剤により，p-HPPHによるMMP-1のmRNAの発現量の低下を抑制することができた．②植物由来の3種類を比較すると，メンソール，カンファ―，シネオールの順に抑制効果が強いことが分かった．