2014 Fiscal Year Annual Research Report
老化関連マイクロRNA標的遺伝子の機能解析とがん治療への応用
Project/Area Number |
26290047
|
Research Institution | Hiroshima University |
Principal Investigator |
田原 栄俊 広島大学, 医歯薬保健学研究院(薬), 教授 (00271065)
|
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
塩谷 文章 独立行政法人国立がん研究センター, その他部局等, 研究員 (10627665)
|
Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
|
Keywords | がんの個別診断 / マイクロRNA / 核酸医薬 / siRNA |
Outline of Annual Research Achievements |
PRPF19遺伝子を標的にしたsiRNAによる膵がんなどへの顕著な抗腫瘍効果のメカニズムを明らかにするために、(A)PRPF19 siRNA処理がん細胞におけるpathway解析、(B)PRPF19siRNAによる紡錘体形成阻害、DNAダメージに及ぼす機能解析、(C)PRPF19 siRNAによる抗腫瘍効果におけるユビキチン活性の関与の検証、(D)PRPF19 siRNAによる抗腫瘍効果におけるスプライシング機能の関与の検証、について実施した。 A)については、PRPF19 siRNA処理した正常線維芽細胞および膵がん細胞株PK8のpathway解析をマイクロアレイ(東レ3Dgene)によりトランスクリプトーム解析を行った。その結果をもとに、GO解析を行ったところ、細胞周期、DNAダメージ経路の寄与が明らかになった。また、共通に変化している遺伝子も見られたが、がん細胞と正常線維芽細胞で、顕著なトランスクリプトームの違いが見られた。(B)については、PRPF19siRNAによる細胞周期に及ぼす影響をFACSおよび蛍光細胞周期プローブ「Fucci」を用いた実験で、PRPF19siRNAにより正常細胞はG2/M期に同調するが、がん細胞はG2/M阻害が見られずS期の進行が見られ、それに伴うDNAダメージにより細胞死が誘導された。また、コメットアッセイにより、PRPF19siRNAによるDSB(二本鎖開裂)を示唆するデータが得られた。(C)に関しては、PRPF19遺伝子のUbox, C末,を欠失させたΔU変異型ΔC変異体およびΔUΔC変異体を構築し、これらを安定に発現する線維芽細胞で構築した。その結果、長期間培養で、細胞は老化様の巨大細胞を形成した。以上、平成26年度は、PRPF19の正常線維芽細胞及び膵がんでのsiRNAによる老化誘導のメカニズムの一部を明らかにできた。
|
Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
(A)から(D)のプロジェクトのうち、(C)の一部の解析の除き、ほぼ計画通りに進行した。
|
Strategy for Future Research Activity |
A)PRPF19 siRNA処理がん細胞におけるpathway解析については、③ PRPF19siRNAに処理がん細胞に共通なシグナル分子の同定。上記①、②のデータに基づき、がん細胞で共通に変動する分子について、RT-PCRおよびウエスタン解析によりその発現を検討する。上記実験で共通分子が同定できた場合は、それらのsiRNAあるいは強制発現ベクターを構築し、siPRPF19による増殖抑制メカニズムに寄与する分子であるか確認を行う。 (B)PRPF19siRNAによる紡錘体形成阻害、DNAダメージに及ぼす機能解析については、DSBダメージのマーカーとして知られるγH2AX、53BPなどを用いて、siPRPF19処理による蛍光免疫染色を行い解析する。 (C)PRPF19 siRNAによる抗腫瘍効果における ユビキチン活性の関与の検証については、①ΔU変異型PRPF19の強制発現における細胞周期解析、②表現型が出たものについてFACSおよび「Fucci」細胞を用いた解析を行う。 (D)PRPF19 siRNAによる抗腫瘍効果におけるスプライシング機能の関与の検証いついては、①次世代シークエンサーを用いたPRPF19 siRNAによるスプライシング異常の解析を行う。具体的には、siPRPF19によるスプライシング異常を次世代シークエンサIonPGMにより解析し、スプライシング異常とsiPRPF19の表現型との違いを検討する。
|
Causes of Carryover |
年度末に使用予定のmiRNA検出プライマーの納期が遅延したため。
|
Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度に、用いるmiRNA検出プライマーに用いる計画である。
|
Research Products
(29 results)
-
[Journal Article] A potential function for neuronal exosomes: sequestering intracerebral amyloid-beta peptide.2015
Author(s)
Yuyama, K., Sun, H., Usuki, S., Sakai, S., Hanamatsu, H., Mioka, T., Kimura, N., Okada, M., Tahara, H., Furukawa, J., Fujitani, N., Shinohara, Y. & Igarashi, Y.
-
Journal Title
FEBS letters
Volume: 589
Pages: 84-88
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
-
[Journal Article] Decreased amyloid-beta pathologies by intracerebral loading of glycosphingolipid-enriched exosomes in Alzheimer model mice.2014
Author(s)
Yuyama, K., Sun, H., Sakai, S., Mitsutake, S., Okada, M., Tahara, H., Furukawa, J., Fujitani, N., Shinohara, Y. & Igarashi, Y.
-
Journal Title
J Biol Chem
Volume: 289
Pages: 24488-24498
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
[Journal Article] Generation of human induced pluripotent stem (Ips) cells in serum- and feeder-free defined culture and TGF-Beta1 regulation of pluripotency.2014
Author(s)
Yamasaki, S., Taguchi, Y., Shimamoto, A., Mukasa, H., Tahara, H. & Okamoto, T.
-
Journal Title
PLoS One
Volume: 9
Pages: e87151
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
[Journal Article] Reprogramming suppresses premature senescence phenotypes of Werner syndrome cells and maintains chromosomal stability over long-term culture.2014
Author(s)
Shimamoto, A., Kagawa, H., Zensho, K., Sera, Y., Kazuki, Y., Osaki, M., Oshimura, M., Ishigaki, Y., Hamasaki, K., Kodama, Y., Yuasa, S., Fukuda, K., Hirashima, K., Seimiya, H., Koyama, H., Shimizu, T., Takemoto, M., Yokote, K., Goto, M. & Tahara, H.
-
Journal Title
PLoS One
Volume: 9
Pages: e112900
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
[Journal Article] DSE-FRET: A new anticancer drug screening assay for DNA binding proteins.2014
Author(s)
Miyagi, T., Shiotani, B., Miyoshi, R., Yamamoto, T., Oka, T., Umezawa, K., Ochiya, T., Takano, M. & Tahara, H.
-
Journal Title
Cancer Sci
Volume: 105
Pages: 870-874
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
[Journal Article] Minimal experimental requirements for definition of extracellular vesicles and their functions: a position statement from the International Society for Extracellular Vesicles.2014
Author(s)
Lotvall, J., Hill, A.F., Hochberg, F., Buzas, E.I., Di Vizio, D., Gardiner, C., Gho, Y.S., Kurochkin, I.V., Mathivanan, S., Quesenberry, P., Sahoo, S., Tahara, H., Wauben, M.H., Witwer, K.W. & Thery, C.
-
Journal Title
Journal of extracellular vesicles
Volume: 3
Pages: 26913
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
[Journal Article] EVpedia: a community web portal for extracellular vesicles research.2014
Author(s)
Kim, D.K., Lee, J., Kim, S.R., Choi, D.S., Yoon, Y.J., Kim, J.H., Go, G., Nhung, D., Hong, K., Jang, S.C., Kim, S.H., Park, K.S., Kim, O.Y., Park, H.T., Seo, J.H., Aikawa, E., Baj-Krzyworzeka, M., van Balkom, B.W., Belting, M., Blanc & Tahara, H.
-
Journal Title
Bioinformatics
Volume: 31(6)
Pages: 933-939
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
[Journal Article] TERT attenuated ER stress-induced cell death.2014
Author(s)
Hosoi, T., Inoue, Y., Nakatsu, K., Matsushima, N., Kiyose, N., Shimamoto, A., Tahara, H. & Ozawa, K.
-
Journal Title
Biochem Biophys Res Commun
Volume: 447
Pages: 378-382
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
[Journal Article] CBP-93872 inhibits NBS1-mediated ATR activation, abrogating maintenance of the DNA double-strand break-specific G2 checkpoint.2014
Author(s)
Hirokawa, T., Shiotani, B., Shimada, M., Murata, K., Johmura, Y., Haruta, M., Tahara, H., Takeyama, H. & Nakanishi, M.
-
Journal Title
Cancer Res
Volume: 74
Pages: 3880-3889
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
[Journal Article] Telomeric g-tail length and hospitalization for cardiovascular events in hemodialysis patients.2014
Author(s)
Hirashio, S., Nakashima, A., Doi, S., Anno, K., Aoki, E., Shimamoto, A., Yorioka, N., Kohno, N., Masaki, T. & Tahara, H.
-
Journal Title
Clinical journal of the American Society of Nephrology : CJASN
Volume: 9
Pages: 2117-2122
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
[Journal Article] Infection with Porphyromonas gingivalis exacerbates endothelial injury in obese mice.2014
Author(s)
Ao, M., Miyauchi, M., Inubushi, T., Kitagawa, M., Furusho, H., Ando, T., Ayuningtyas, N.F., Nagasaki, A., Ishihara, K., Tahara, H., Kozai, K. & Takata, T.
-
Journal Title
PLoS One
Volume: 9
Pages: e110519
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-