2016 Fiscal Year Annual Research Report
Structural study of a huge respiratory supermolecule hemocyanin
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26291008
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
田中 良和 北海道大学, 先端生命科学研究科(研究院), 准教授 (20374225)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
姚 閔 北海道大学, 先端生命科学研究科(研究院), 教授 (40311518)
加藤 公児 北海道大学, 先端生命科学研究科(研究院), 助教 (30452428)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | タンパク質 / 構造解析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
イカなどの軟体動物はヘモシアニンという超巨大蛋白質会合体をもちいて，酸素運搬を行っている．ヘモシアニンはその大きさを利用して，ハプテンのキャリア蛋白質やワクチンの免疫賦活剤として利用されている．このように応用研究に用いられる一方で，これまで，X線結晶構造解析による高解像度での構造解析は成功していないため，詳細な構造は明らかになっていなかった．本研究では，X線結晶構造解析により，分子量4MDaにも及ぶ超巨大なヘモシアニン会合体の原子構造を決定する事を目指す．
前年度までに，スルメイカ由来ヘモシアニンの3.0Å分解能の結晶構造解析をStructure誌に成果を発表した．平成28年度は，無酸素状態でのヘモシアニンの結晶構造解析を目指した．8オングストローム分解能のデータを用いて，分子置換法による解析を行ったところ，結晶中でのパッキングが明らかになり，これは酸素存在下での結晶のパッキングとは大きく異なっていた．精密化のできる精度のデータ収集を試みたが，良質なデータは得られなかった．
ドメイン間の相互作用解析を目指し，各ドメインの異種発現系の構築を試みた．ゲノムDNAからサブクローニングし，幾つかのドメインの大腸菌発現ベクターを作成した．大腸菌を用いて発現させたところ，可溶性の分子として調製することができた．精製した試料の分光学的特性を調べたところ，活性部位に存在するべきCu2O2クラスターが結合していないことがわかった．
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| Research Progress Status |
28年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
28年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Causes of Carryover |
28年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
28年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Journal Article] Biochemical and structural characterization of oxygen-sensitive 2-thiouridine synthesis catalyzed by the iron-sulfur protein TtuA2017
Author(s)
Minghao Chen, Shin-ichi Asai, Shun Narai, Shusuke Nambu, Naoki Omura, Yuriko Sakaguchi, Tsutomu Suzuki, Masao Ikeda-Saito, Kimitsuna Watanabe, Min Yao, Naoki Shigi and, Yoshikazu Tanaka
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Journal Title
Proc. Natl. Acad. Sci. USA
Volume: 印刷中
Pages: 印刷中
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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[Presentation] 巨大タンパク質会合体ヘモシアニンの多孔質性結晶を用いた生体分子の包摂2016
Author(s)
Asuka Matsuno, Ye Yuxin, Yuki Ohnishi, Akira Kitamura, Masataka Kinjo, Satoshi Abe, Takafumi Ueno, Yoshikazu Tanaka, Min Yao
Organizer
第54回日本生物物理学会年会
Place of Presentation
つくば国際会議場(茨城県，つくば市)
Year and Date
2016-11-25 – 2016-11-27
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