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2015 Fiscal Year Annual Research Report

心機能調節におけるCCR4-NOTデアデニレースの作用機構と創薬への応用

Research Project

Project/Area Number 26293050
Research InstitutionAkita University

Principal Investigator

久場 敬司  秋田大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (10451915)

Project Period (FY) 2014-04-01 – 2017-03-31
KeywordsCCR4-NOT
Outline of Annual Research Achievements

本研究課題達成のために平成27年度は下記の検討を行った。
1)CCR4-NOT複合体によるRNA制御機構の解析:PAR-CLIPの手法により、CNOT1が直接RNAを認識し結合する可能性を検討したが、明らかにCNOT1と直接結合するRNAは認められなかったことから、CNOT1と会合するRNA結合蛋白からのアプローチが重要であると結論づけられた。
2)デアデニレース欠損マウスの心不全病態モデルでの解析:CCR4-NOTのdeadenylaseサブユニット 4個全ての遺伝子欠損マウスについて、心不全モデルで機能解析を行った結果、いずれのdeadenylase欠損マウスにおいても一様にマイルドな心機能低下と心肥大をきたした。つまり、deadenylaseサブユニットがそれぞれに特異的な標的遺伝子、RNA結合タンパクを介してpoly(A)鎖長、遺伝子発現を制御するというよりも、deadenylase欠損による量的な酵素活性の低下により心臓の表現型がもたらされたことが考えられた。さらにRNAseqによる遺伝子発現解析を行ったところ、サブユニット間の標的RNAや機能の類似性などが見出された。
3)新規CCR4-NOT関連因子の遺伝子欠損マウスの作製:CCR4-NOT複合体内のデアデニレース酵素(CNOT6/6L/7/8)以外にも、生理機能が不明なデアデニレース遺伝子について、CRISPR/Cas9ゲノム編集により2系統の遺伝子変異ES細胞を作製した。また、CCR4-NOT関連の蛋白修飾因子についてもconditional遺伝子改変マウスの作製を進めた。
4)核酸代謝センサー分子の機能解析:CNOT3遺伝子欠損マウスにおける核酸代謝の変化を感知するセンサー分子とCNOT3の二重欠損マウスを作製したところ、CNOT3欠損による細胞死を部分的に抑制することが分かった。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

心臓におけるCCR4-NOTデアデニレースの作用機構の解明に向けて成果を上げつつある。

Strategy for Future Research Activity

CCR4-NOT複合体によるRNA制御機構を解明するため、CRISPRによるCnot1のFlagタグ付加を行い、内因性のCnot1蛋白のプルダウンによる結合蛋白の解析を進めており、包括的なRNA認識分子の探索を行う。見出されたRNA認識分子に着目してPAR-CLIPの実験を行うことにより、CCR4-NOTが制御するRNA分子の全容を明らかにする。ポリA鎖の長さと翻訳、分解の相関を調べるため、TAIL-seqによるポリA鎖の長さ測定の実験システムを構築する。また、核酸のセンサー分子の機能解析を相互作用因子の観点から解析を進める。さらに、CCR4-NOTデアデニレース阻害剤の候補物質をスクリーニングするために、in silicoでのデアデニレース因子の活性中心に結合する化合物のスクリーニング、ならびにin vitroでのデアデニレース蛋白を用いたアッセイでのスクリーニングを行う。

  • Research Products

    (11 results)

All 2016 2015

All Journal Article (1 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Peer Reviewed: 1 results,  Open Access: 1 results) Presentation (10 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Invited: 4 results)

  • [Journal Article] Cationic nanoparticles directly bind angiotensin-converting enzyme 2 and induce acute lung injury in mice.2015

    • Author(s)
      Sun Y, Kuba K, et al.
    • Journal Title

      Part Fibre Toxicol.

      Volume: 12 Pages: 4

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Presentation] Dissecting the functional role of A Novel APJ ligand, ELABELA, in heart failure2016

    • Author(s)
      佐藤輝紀、久場敬司
    • Organizer
      日本薬理学会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      2016-03-09 – 2016-03-09
  • [Presentation] RNA分解による心臓エネルギー代謝の恒常性維持2016

    • Author(s)
      久場敬司
    • Organizer
      第4回 CCR4-NOT研究会
    • Place of Presentation
      秋田
    • Year and Date
      2016-02-12 – 2016-02-13
  • [Presentation] RNA分解制御による心臓エネルギー恒常性維持の分子機構2015

    • Author(s)
      久場敬司
    • Organizer
      BMB2015
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      2015-12-04 – 2015-12-04
  • [Presentation] 心臓における新規Apelin受容体リガンドApelaの機能的意義の解析2015

    • Author(s)
      久場敬司
    • Organizer
      生理学研究所 研究会 2015 「心臓・血管系の包括的な機能統合研究」
    • Place of Presentation
      岡崎
    • Year and Date
      2015-10-29 – 2015-10-30
  • [Presentation] CNOT3を介した心臓のアデニン核酸制御機構の解析2015

    • Author(s)
      山口智和、久場敬司
    • Organizer
      第66回 日本薬理学会北部会
    • Place of Presentation
      富山
    • Year and Date
      2015-09-18 – 2015-09-18
  • [Presentation] Signaling network to maintain cardiac homeostasis in failing hearts2015

    • Author(s)
      久場敬司
    • Organizer
      The 4th Hsien Wu and Ray Wu Symposia “Proteins, Genes and Diseases”
    • Place of Presentation
      北京
    • Year and Date
      2015-08-10 – 2015-08-12
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] CCR4-NOT複合体によるアデニン核酸制御機構の解析2015

    • Author(s)
      山口智和、久場敬司
    • Organizer
      RNA学会
    • Place of Presentation
      札幌
    • Year and Date
      2015-07-13 – 2015-07-13
  • [Presentation] mRNA分解制御を介した心臓の恒常性維持2015

    • Author(s)
      久場敬司
    • Organizer
      第一回 J-ISCP学術集会
    • Place of Presentation
      京都
    • Year and Date
      2015-06-20 – 2015-06-20
    • Invited
  • [Presentation] 心臓のmRNA分解とエネルギー代謝の恒常性維持2015

    • Author(s)
      久場敬司
    • Organizer
      第2回 仙台先進循環器研究会
    • Place of Presentation
      仙台
    • Year and Date
      2015-06-20 – 2015-06-20
    • Invited
  • [Presentation] アンジオテンシン変換酵素2(ACE2)の多彩な生理機能と制御機構の解明2015

    • Author(s)
      久場敬司
    • Organizer
      第160回日本循環器学会東北地方会
    • Place of Presentation
      盛岡
    • Year and Date
      2015-04-10 – 2015-04-10
    • Invited

URL: 

Published: 2017-01-06  

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