2015 Fiscal Year Annual Research Report
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26293108
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
大洞 將嗣 九州大学, 生体防御医学研究所, 准教授 (40351506)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小迫 英尊 徳島大学, 藤井節朗記念医科学センター, 教授 (10291171)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 免疫シグナル伝達 / カルシウム / T細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は、カルシウムシグナルを切り口として胸腺細胞の選択と選択後の成熟過程の分子制御機構を明らかにすることである。本年度は以下の解析を行った。
1. TRPM7単独のT細胞特異的ノックアウトマスの末梢T細胞の解析を行った。In vitro におけるTh1、Th2、Th17など各ヘルパーT細胞の分化は正常であり、サイトカイン産生も正常であった。また、抗原としてOVA（ニワトリ卵白アルブミン）を投与し、遅延型過敏症反応を惹起させたが、この反応も正常であった。これまでの結果によって、TRPM7を介した２価陽イオンの流入はT細胞の分化や機能に必須ではない可能性が示唆された。Stim1、Stim2、Trpm7の３重欠損マウスの作製は継続中である。
2. Kdm5bのT細胞特異的ノックアウトマスの作製を開始し、現在までにヘテロKOマウスを得ている。
3. 新規にOrai2欠損マウスを作製し、その解析を行った。Orai2はストア作動性カルシウムチャネルOrai1のファミリー分子であるが、その機能は不明である。我々を含む複数のグループは、Orai1欠損では完全にカルシウム流入が消失しないことを明らかにしている。Orai2が胸腺細胞およびナイーブT細胞において高く発現しているため、Orai2がカルシウム流入を補完していると考えられてきた。しかし解析の結果、予想に反し、T細胞の分化、TCR刺激によるカルシウム流入、増殖は野生型と同等であった。
4. ストア作動性カルシウム流入が自己反応性の胸腺ダブルポジティブ細胞において、アゴニスト選択におけるCD4とCD8の発現低下、PD-1の発現上昇に必須であり、TCRαβ(+)CD8αα(+)腸管上皮細胞間リンパ球の胸腺前駆細胞に必須であることを明らかにした。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
自己反応性の胸腺ダブルポジティブ細胞とカルシウムシグナルの項目を予想より早く明らかにすることができた。またOrai2欠損マウスの解析によって、T細胞分化を正に制御するカルシウム透過性チャネルの絞り込みも進んだ。一方で、カルシニューリンの標的タンパク質の同定はやや遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
カルシニューリンの標的タンパク質の同定は、比較するサンプル数に制限があった2D-DIGE法に代わり、制限のない2DICAL法による比較解析法を用いることによって候補分子を同定するように計画を変更した。Stim1、Stim2、Trpm7の３重欠損マウス、Kdm5b欠損マウスは個体が得られ次第、解析を行う。
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| Causes of Carryover |
前年度からの繰越しがあったことと、網羅的な遺伝子発現解析を次年度に繰越したため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
網羅的な遺伝子発現解析、プロテオーム解析に行う予定であり、予定通り関連物品を購入する。
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[Presentation] Endoplasmic reticulum calcium sensors, Stim1 and Stim2, control dendritic cell functions.2015
Author(s)
Soichiro Yoshikawa, Masatsugu Oh-hora, Kensuke Miyake, Lihua Li, Takuya Ohta, Kayo Horiguchi, Yoshinori Yamanishi, Hajime Karasuyama
Organizer
NIPS International Workshop, TRPs and SOCs
Place of Presentation
岡崎
Year and Date
2015-06-04 – 2015-06-05
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