2014 Fiscal Year Research-status Report
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26460653
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| Research Institution | Dokkyo Medical University |
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Principal Investigator |
菱沼 昭 獨協医科大学, 医学部, 教授 (40201727)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小飼 貴彦 獨協医科大学, 医学部, 准教授 (40711693)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 甲状腺癌 / サイログロブリン異常症 / HMGA2 / 免疫染色 / 発癌機序 / 甲状腺腫瘍 / 濾胞癌 / 未分化癌 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
われわれは、サイログロブリン異常症にともなう発癌機序の培養細胞を用いた検索から、間葉系細胞の分化に関わる分化マーカーの1つである HMGA2 の発現が甲状腺における発癌機序の一端を担っていると考え、甲状腺腫瘍組織および甲状腺細胞モデルを用いて、その発現調節および作用機序の解明を目指している。
平成26年度には、甲状腺組織における HMGA2 タンパク質の発現を、各種甲状腺腫瘍の手術検体を用いて免疫染色にて検討し、興味深い知見を得た。すなわち、分化型癌（乳頭癌、濾胞癌）の過半数（8例中6例）、全ての未分化癌（3例中3例）で腫瘍辺縁に巣状に細胞核の染色が認められた一方、良性疾患（濾胞腺腫１例、腺腫様甲状腺腫３例）ではいずれも発現を認めなかった。これらは、HMGA2 の悪性腫瘍における関与を強く示唆する所見であり、われわれの培養細胞モデルを用いた上記の仮説、あるいは欧米での免疫染色の報告にもおおむね一致している。特筆すべきは、濾胞癌において、ほとんどの検体で被膜浸潤を示す腫瘍辺縁部に選択的にHMGA2の染色が認められたことで、濾胞腺癌の確定診断が被膜浸潤の有無で決定されること、それにもかかわらず、従来のHE染色法では被膜浸潤の判定にしばしば困難をともない、良性の濾胞腺腫との鑑別に難渋するケースもあることから、今後HMGA2 の免疫染色が濾胞癌の診断に応用できる可能性が示唆された。これらの知見をもとに、現在多数の濾胞癌検体を用いた免疫染色を施行準備中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究計画（1）甲状腺組織の HMGA2 発現量の評価
本年度は主に免疫組織染色による蛋白質発現の評価が行われた。免疫染色の再現性を担保するため、HMGA2 の強発現が報告されている大腸癌検体を用いて予備実験を行い、染色結果の再現性が高いモノクローナル抗体を同定した（D1A7）。その結果をもとに、甲状腺癌（分化癌、未分化癌を含む）、甲状腺良性腫瘍、それぞれ少数例での検討がまず行われ、とくに、甲状腺濾胞癌の確定診断におけるHMGA2 の免疫染色の応用の可能性が“研究実績の概要”に記載したとおり示唆された。これらの成果の一部は当該年度の日本臨床検査医学会学術集会、および日本甲状腺学会各術集会において発表された。
研究計画（2）甲状腺組織内の HMGA2 制御 miRNA の発現の検討
当初の計画では甲状腺腫瘍組織で HMGA2 を過剰発現している検体を用いて、HMGA2 を制御する可能性のある miRNA の発現検討を行う予定であったが、上記の免疫組織染色法による検討では、各腫瘍組織における HMGA2 の発現は巣状に分布しており、陽性細胞が過半数を占める組織は認められなかった。この結果は、試料採取部位によって、HMGA2 およびその制御因子の発現パターンが異なることを示唆している。マイクロダイセクション法によるHMGA2 強発現部位の切り出しも検討されたが、設備、コストの点から現時点では困難と判断された。そこで、“今後の研究の推進方策”に示すとおり、培養細胞モデルを用いた検索を優先することとした。
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| Strategy for Future Research Activity |
研究計画（1）甲状腺組織の HMGA2 発現量の評価 本年度の予備実験により、甲状腺濾胞癌の診断へのHMGA2免疫染色の応用の可能性が示された。当初の計画のとおり、次年度以降もさらに検体数を増やしてHMGA2 の免疫染色の甲状腺癌の診断に対する有用性を確認する。さらに、観察されている濾胞癌における染色パターンについて、使用したモノクローナル抗体に特異的に認められる現象なのか、あるいは HMGA2 の発現を忠実に反映し、他の多くの抗体でも同じ結果が得られるのかについて、あらたに検討を加える予定である。
研究計画（２）甲状腺組織内の HMGA2 制御 miRNA の発現の検討 当セクションの主目的が甲状腺腫瘍組織でHMGA2 を制御する miRNA の同定であることを鑑み、HMGA2 の強発現がすでに報告されている甲状腺乳頭癌細胞株 TPC1 、および当初の計画にはなかったHMGA2 発現量未知の濾胞癌細胞株 FTC-133を入手し、現在miRNA PCR array の準備、およびHMGA2 遺伝子、あるいはmiRNAの過剰発現実験のためのトランスフェクション条件の最適化を進めている。
研究計画（３）甲状腺癌細胞株における HMGA2 遺伝子の転写後発現制御 上記の通り、2種の甲状腺癌細胞株を用いた小分子RNAのトランスフェクション実験の予備実験が開始されている。（2）の結果に基づき、順次 HMGA2 制御 miRNA の機能確認を施行する予定である。
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Research Products
(2 results)
