2015 Fiscal Year Research-status Report
B型肝炎ウイルスcccDNAを標的とするDNA編集酵素の役割
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26460993
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Research Institution | Kanazawa University |
Principal Investigator |
喜多村 晃一 金沢大学, 医学系, 助教 (70378892)
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Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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Keywords | B型肝炎ウイルス |
Outline of Annual Research Achievements |
B型肝炎ウイルス(HBV)持続感染者は国内で130~150万人と推定されており、感染を放置すれば慢性肝炎、肝硬変、肝がんへと進行するおそれがある。HBV持続感染では、cccDNAと呼ばれる環状ウイルスDNAが、宿主細胞の核内に維持されウイルス複製の鋳型となる。cccDNAを除去する有効な治療法は無く、B型肝炎の根治が難しい理由となっているが、これまで解析系が十分でなかったために、cccDNAを標的とする分子機構の知見が少ない。本研究では、HBV cccDNAに作用し遺伝情報を改変すると考えられる宿主因子AID/APOBEC蛋白質の分子機構とその役割について解析を行い、B型肝炎克服への手がかりを得ることを目指している。本年度はTet-offプロモーター制御下でHBVが産生される培養細胞株を用いた解析を中心に行った。これにより実験開始時までに持ち込まれるcccDNA量を抑えることができるので、よりcccDNA解析に優れ、またtet存在下でcccDNA由来ウイルス複製能の解析が可能になる。解析の結果、細胞株へのIFNγによりAPOBEC3Gが発現上昇しcccDNAへの変異頻度が増加すること、UNGの阻害によってそれが増強されることが確認された。この条件の下さらにtet存在下での培養を続けると、cccDNA変異頻度の上昇と相関してウイルス産生量の減少が見られた。このことからcccDNA変異導入によるウイルス複製能阻害効果が示唆された。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究のターゲットはHBV cccDNAに対する宿主因子の作用である。当該年度からのHBV産生量をコントロールできるtet-off系の導入によって、実験開始前までに作られるcccDNAの影響を排除でき、またtransgene由来のHBV産生を抑えることで、cccDNA由来のウイルス複製をより高精度に解析できたと考える。
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Strategy for Future Research Activity |
これまでの予測通り、cccDNAへの変異導入が高頻度に観察されたので、次世代シーケンサーを用いてより詳細な解析を行う。
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Causes of Carryover |
次年度に使用することが効率的であると考えたため。
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Expenditure Plan for Carryover Budget |
消耗品購入等にあてる。
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Research Products
(4 results)
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[Journal Article] TGF-β suppression of HBV RNA through AID-dependent recruitment of an RNA exosome complex.2015
Author(s)
Liang G, Liu G, Kitamura K, Wang Z, Chowdhury S, Monjurul AM, Wakae K, Koura M, Shimadu M, Kinoshita K, Muramatsu M.
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Journal Title
PLoS Pathog
Volume: 11
Pages: e1004780
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Detection of hypermutated human papillomavirus type 16 genome by Next-Generation Sequencing.2015
Author(s)
Wakae K, Aoyama S, Wang Z, Kitamura K, Liu G, Monjurul AM, Koura M, Imayasu M, Sakamoto N, Nakamura M, Kyo S, Kondo S, Fujiwara H, Yoshizaki T, Kukimoto I, Yamaguchi K, Shigenobu S, Nishiyama T, Muramatsu M.
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Journal Title
Virology
Volume: 485
Pages: 460-466
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
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