2014 Fiscal Year Research-status Report
iPS細胞および脱細胞化・再細胞化技術を用いた子宮再構築
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26861340
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
宮崎 薫 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (90445370)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | iPS細胞 / ミュラー管 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1.ラットinduced pluripotent stem（以下iPS）細胞のクローン化と蛍光タンパク遺伝子導入
ラットiPS細胞をApplied Biological Materials社より購入し，培養・増殖を行った．将来的なin vivoでの非侵襲性解析やcell tracingを鑑み，レンチウィルスベクター（targeting systems社より購入）にてgreen fluorescent protein（以下GFP）遺伝子およびLuciferase遺伝子を導入した．MoFlo XDP（Beckman Coulter社）を使用したFluorescense-activated cell sorting（FACS）にてGFP陽性細胞を分取し，GFP陽性ラットiPS細胞のクローニングに成功した．さらに，GFP陽性ラットiPS細胞を免疫不全マウスに皮下移植し，in vivo imaging system（IVIS；住商ファーマ）を用いた細胞発光の追跡が可能であることを確認した．さらに，6週間後の奇形腫形成を確認した．
2.ラットiPS細胞のミュラー管系統への分化
ラットiPS細胞から子宮を再構築するという最終目標を達成するにあたり，近年報告されている他臓器への多能性幹細胞の分化の知見から，発生生物学に基づき，中胚葉を経由してiPS細胞をミュラー管系統に分化させるのが妥当と判断した．ラットiPS細胞を，各分化段階に応じて培養液中の各種増殖因子などの組成を変えながら培養した．リアルタイムPCRやフローサイトメトリーにて，ラットiPS細胞が中胚葉，中間中胚葉を経てミュラー管系統に分化していることが示唆された．細胞外基質を用いた包埋培養では，分化した細胞が3次元のスフェア構造を形成していた．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ラットiPSのミュラー管系統への分化については，至適な条件設定に加えて，一定の成果が得られているので，「(2)おおむね順調に進展」とした．
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| Strategy for Future Research Activity |
引き続き分化プロトコルの改良を重ねていくとともに，今後は以下を行う．
【1】上記の分化プロトコル中の各分化段階のiPS細胞と，実際のラット胎児の各分化段階のミュラー管のDNAマイクロアレイを行い，遺伝子発現プロファイリングの比較を行う．
【2】上記の分化プロトコル中の各分化段階のiPS細胞と，実際のラット胎児の各分化段階のミュラー管のレクチンアレイを行い，細胞表面糖鎖プロファイリングの比較を行う．
【3】上記の分化プロトコルで分化させたiPS細胞を免疫不全マウスに移植し，子宮組織を再構築できるか検討する．
【4】脱細胞化マトリックスに分化させたiPS細胞を注入し，灌流培養を行って，子宮組織を再構築できるか検討する．
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| Causes of Carryover |
未使用額の発生は効率的な物品調達を行った結果である。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度の研究費と併せて消耗品購入や論文作成費用に充てる予定である。
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Research Products
(30 results)
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[Presentation] 頸管拡張を必要としない子宮鏡下ポリープ切除術．2014
Author(s)
升田博隆, 佐藤健二, 佐藤 卓, 太田邦明, 三木史恵, 宮崎 薫, 内田明花, 各務真紀, 内田 浩, 丸山哲夫, 吉村泰典, 田中 守
Organizer
第54回日本産科婦人科内視鏡学会
Place of Presentation
城山観光ホテル（鹿児島県鹿児島市）
Year and Date
2014-09-11 – 2014-09-13
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[Presentation] 子宮内膜症から発生したと推察された癌肉腫の一例．2014
Author(s)
吉丸真澄, 仲村 勝, 栗原朋子, 布施由紀子, 宮田あかね, 宮崎 薫, 小川真里子, 吉田丈児, 高松 潔
Organizer
第56回日本婦人科腫瘍学会学術講演会
Place of Presentation
栃木県総合文化センター（栃木県宇都宮市）
Year and Date
2014-07-17 – 2014-07-19
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