種々の型のHGPRT欠損症の重症度の判定と保因者診断のための検査法の開発

1987 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 62570303
• Research Institution: Tokyo Women's Medical University
• Principal Investigator: 西岡 久寿樹 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (60049070)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 渡辺 富博 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (50182936) ; 河井 和夫 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (60152899) ; 寺井 千尋 東京女子医科大学, 医学部, 講師 (40188660) ; 鎌谷 直之 東京女子医科大学, 医学部, 助教授 (00114447)
• Keywords: 痛風 / 部分欠損症 / 保因者

Research Abstract

HGPRT欠損症, 痛風及び精神神経症状を呈するX染色体性の遺伝性疾患である. 我々はすでにHGPRT完全欠損症について, その保菌者を確実に診断する方法を開発している. しかし, HGPRT部分欠損症については, いまだ確実に保菌者を診断できる方法はない. 我々は, すでに判明している人間のHGPRT酵素のアミノ酸配列のうち, PRPP結合部位と思われる配列を人口合成した. その, 15アミノ酸からなるペプチドをBSA及びKLHに結合させ, 家兎で免疫して抗体を得た. この抗体は, もちろんのこと, この15アミノ酸よりなるペプチドと結合した. さらに, この抗体がHGPRT酵素を確認できるか否かを検討した. まず, 正常, 及び, HGPRT完全欠損症のB cell line より細胞抽出液を作製した. これらをSDS-PAG電気泳動にかけ, ゲルから電気転写により蛋白質をニトロセルロース膜に移した. その後でニトロセルロース膜を, 抗体によって染色した. 正常のB cell extractはバンドを示したが, HGPRT完全欠損症のB cell extractはバンドを示さなかった. 従って, この抗体は確かにHGPRTを検出できる抗体である. これにより, 細胞抽出液中のHGPRTを蛋白質として検出できるようになった. さらに, 我々はB cell lineをb-thioguanine, δ-azaguanineなどのguanine類似体と培養することにより, 機能的なHGPRTを測定することができるようになった. 以上のような方法が, 保菌者の診断に有効であると考えられるが, HGPRT部分欠損症については, いまだ完全に診断できるまでには至っていない.

Research Products

• [Publications] K.Yamamoto,H.Miura,Y.Moroi,S.Yoshinoya,M.Goto,K.Nishioka,T.Miyamoto: The Journal of Immunology. 140:1:. 311-317 (1988)
• [Publications] K.Sato,N.Miyasaka,K.Yamanaka M.Okuda,J.Yata,K.Nishioka: Arthritis and Rheumatism. 30:12:. 1407-1411 (1987)
• [Publications] R.Sakuma,T.Nishina,M.Kitamura,H.Yamanaka,N.Kamatani,K.Nishioka: Clinica Chimica Acta. 170. 281-290 (1987)
• [Publications] M.Goto,T.Miyamoto,K.Nishioka,S.Uchida: Arthritis & Rheumatism. 30. 737-743 (1987)
• [Publications] K.Sato,N.Miyasaka,K.Nishioka, et al.,: Arthritis & Rheumatism. 30. 717-718 (1987)
• [Publications] N.Kamatani,S.Kurosima,C.Terai,K.Kawai,K.Mikanagi,K.Nishioka: Human Genetics. 76. 148-152 (1987)