細胞外ATPによるCa^<++>、イノシト-ルりん酸代謝とEGF受容体の機能変化の研究

1989 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 62570840
• Research Institution: Meikai University
• Principal Investigator: 細井 和雄 明海大学, 歯学部, 助教授 (10049413)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 杉田 憲司 明海大学, 歯学部, 助手 (90171157) ; 栗原 琴二 明海大学, 歯学部, 助手 (10170086)
• Keywords: P_2プリン受容体 / EGF受容体 / 蛋白質りん酸化 / イノシト-ル代謝 / 細胞内カルシウム / カルシウムインフラックス

Research Abstract

A431ヒト類表皮癌培養細胞において細胞外に添加されたATPをはじめとする数種のヌクレオチドは本培養細胞の種々の生理機能に影響を与えた。即ち、(a)イノシト-ル3りん酸(IP_3)の上昇、(b)細胞内カルシウムの動員と細胞外^<45>Ca^<2+>の細胞内への流入促進、(c)EGF受容体のりん酸化と受容体機能の調節、(d)[^3H]イノシト-ルの細胞内への取り込みおよび細胞膜イノシト-ル燐脂質への生合成の促進などである。これらを詳細に調べた結果、以下のことが明らかになった。(1)ATPによるIP_3上昇は約30秒でピ-クを与え、そのタイムコ-スは細胞内カルシウム上昇のそれとよく一致した。しかし、細胞外から細胞内への^<45>Ca^<2+>の流入のタイムコ-スは前2者よりも少し遅れた。(2)細胞内カルシウムの上昇および細胞外から細胞内への^<45>Ca^<2+>流入を起こすヌクレオチドあるいはヌクレオシド20種のうち、ADP、UDP、ATP、UTP、GTPなどは両活性を賦活化したが、その他のヌクレオチドはいずれも両活性を賦活化せず、細胞内カルシウム動員作用とカルシウム流入の間には明確な相関関係が存在した。(3)ヌクレオチドによる^<45>Ca^<2+>流入の上昇は細胞内カルシウムの上昇及びIP_3産生と平行して起こり、細胞に十分量のカルシウムが存在するときにIP_3産生が起こることから短時間に供給または枯渇され得る細胞内の結合型カルシウムが、IP_3酸性に必須の成分であることが判明した。(4)上記の細胞内変化の結果EGF受容体のセリン及びスレオニン残基がりん酸化されEGFの受容体に対する親和性が低下した。(5)EGFおよびATPは[^3H]イノシト-ルの細胞内への取り込みおよび細胞膜イノシト-ル燐脂質への生合成を促進した。

Research Products

• [Publications] Murai,T.et al.: "Androgen responsiveness of proteinase F in the submandibular salivary glands of inbred mice." The Japanese Journal of Physiology. 37(5). 871-879 (1987)
• [Publications] Hosoi,K.et al.: "Modulation of HLA antigens in response to the binding of epidermal growth factor by A431 cells." FEBS Letters. 231(2). 371-377 (1988)
• [Publications] Hosoi,K.et al.: "A simple and rapid purification procedure for the tetramethyl-rhodamine labeled antibodies." The Japanese Journal of Physiology. 39(2). 317-324 (1989)
• [Publications] 小玉昭子 他: "ROS17/2.8細胞による^<45>Ca^<2+>取り込みとアルカリフォスファタ-ゼ活性に与える各種骨代謝因子の作用" 明海大学歯学雑誌. 18(1). 82-87 (1989)
• [Publications] Hosoi,K.et al.: "Exogenous ATP and other nucleoside phosphates modulate epidermal growth factor receptors of A-431 epidermoid carcinoma cells." The Proceedings of The National Academy of Sciences,U.S.A.86(12). 4510-4514 (1989)
• [Publications] 細井和雄他: "レ-ザ-を用いた蛍光分析による単一細胞レベルでの細胞内カルシウムの測定" 医学のあゆみ. 150(9). 590 (1989)
• [Publications] Hosoi,K.et al.: "Postnatal changes in an α-subunit isoform,α(S),of Na^+,K^+-ATPase in the submadibular gland of rats." Enzyme. 42(3). 152-159 (1989)
• [Publications] Kurihara,K.et al: "A new isoform of α-subunit of Na^+,K^+-ATPase from the submadibular gland of rats." Biochimica et Biophysica Acta. (1990)
• [Publications] 小玉昭子 他: "ROS17/2.8細胞のアルカリホスファタ-ゼ活性および^<45>Ca^<2+>取り込みに対する各種骨代謝因子並びにL-アスコルビン酸の影響。" 明海大学歯学雑誌. (1990)
• [Publications] Hosoi,K.et al.: "Production of a human-mouse hybrid cell line expressing both HLA and H-2 antigens." The Japanese Journal of Physiology. (1990)
• [Publications] Atsumi,T.et al.: "Study of stability of HLA and H-2 expressed on human-mouse hybrid cells"
• [Publications] Sugita,K.et al.: "Effects of Ca^<2+> and Mg^<2+> on ATP dependent ^<45>Ca^<2+> influx in A-431 human epidermoidal carcinoma cells"
• [Publications] Hosoi,K.et al.: "P_2 purinoceptors and cellular calcium metabolism in A-431 human epidermoidal carcinoma cells"
• [Publications] 栗原琴二 他: "A-431細胞のecto-ATPaseの酵素学的諸性質について"
• [Publications] Hosoi,K.et al.: "Involvement of cellular calcium incorporated from the medium in production of inositol trisphosphate in A431 cells"
• [Publications] 細井和雄 他: "動物成分利用集成(陸産動物 篇)(奥山隆監修)" R&Dプランニング(東京), 940 (1987)
• [Publications] 細井和雄 他: "細胞、抗体、遺伝子の基礎実験法(堀尾武一監修)" 南江堂(東京), (1990)