2011 Fiscal Year Annual Research Report
胸腺髄質上皮細胞分化機構の解明
Publicly Offered Research
| Project Area | Molecular mechanisms of cell fate determination in the cells that undergo stepwise differentiation to multiple pathways |
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| Project/Area Number |
23118520
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| Research Institution | The University of Tokushima |
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Principal Investigator |
松本 満 徳島大学, 疾患酵素学研究センター, 教授 (60221595)
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| Keywords | 自己寛容 / 胸腺 / AIRE |
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| Research Abstract |
Aire発現細胞の系譜を解析できるfate-mappingの実験系め構築を進めたところ、意外にもAireが初期胚にも発現していることを見出した。すなわち、Aireは発隼初期と胸腺髄質上皮細胞という二相性発現を示すことが明らかになった。そこで、Cre recombinaseに代わりCre recombinaseとヒトエストロゲン受容体リガンド結合領域の変異体との融合タンパク質(Cre-ER)を挿入したノックインマウスを作製した。Cre-ERは内在性めエストラジオールでは核内移行せず、合成エストロゲン製剤である4-水酸化タモキシフェン(tamoxifen)の投与によって核内移行しCre recombinase活性を発揮する。そのため、Aire/Cre-ERノックインマウスをGFPレポーターマウスと交配後の成体マウスにタモキシフェンを投与することでAire発現胸腺髄質上皮細胞を特異的に可視化できる。タモキシフェン投与後に異なるタイミングでGFP陽性細胞を検出することによって、Aire発現胸腺髄質上皮細胞が胸腺内に存在する時間を計測することが可能である。実際にこの実験系を用いてAire発現胸腺髄質上皮細胞のAire発現以降の胸腺内滞在時間を測定したところ、約10日間であることが判明した。さらに、この実験をAire欠損状態(Aire欠損マウスとの交配によって樹立)で行うことによって、Aire欠損にともなうAire発現胸腺髄質上皮細胞の動態変化を調べる実験にも着手している。このようなイメージング解析の結果をもとに、Aireを発現した後、Aire発現胸腺髄質上皮細胞がただちに死滅するか、あるいはAire発現が停止した時期を経て最終的に胸腺から消え去るのかを調べ、Aireにproapoptotic活性があるか否かを検証したい。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
Aire/Cre-ERノックインマウスも計画通りに樹立することができ、時期特異的fate-mappingの実験系も順調に進行している。
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| Strategy for Future Research Activity |
時期特異的fate-mappingマウスをAire欠損マウスと交配し、Aire欠損状態で行う実験も併行して開始している。複数の遺伝子導入マウスの複雑な交雑になるので、効率良くマウスを維持・管理する必要がある。
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Research Products
(8 results)
