Improvement of an animal cell-displaying technology by using a splicing factor

• Project/Area Number: 15H04196
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 一般
• Research Field: Biofunction/Bioprocess
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: Kanayama Naoki 岡山大学, ヘルスシステム統合科学研究科, 准教授 (70304334)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 徳光 浩 岡山大学, ヘルスシステム統合科学研究科, 教授 (20237077) ; 曲 正樹 岡山大学, ヘルスシステム統合科学研究科, 助教 (50359882)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2019-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2018)
• Budget Amount: ¥16,640,000 (Direct Cost: ¥12,800,000、Indirect Cost: ¥3,840,000); Fiscal Year 2018: ¥3,380,000 (Direct Cost: ¥2,600,000、Indirect Cost: ¥780,000); Fiscal Year 2017: ¥4,810,000 (Direct Cost: ¥3,700,000、Indirect Cost: ¥1,110,000); Fiscal Year 2016: ¥4,030,000 (Direct Cost: ¥3,100,000、Indirect Cost: ¥930,000); Fiscal Year 2015: ¥4,420,000 (Direct Cost: ¥3,400,000、Indirect Cost: ¥1,020,000)
• Keywords: 抗体 / バイオテクノロジー / 細胞工学 / DT40 / AID / 抗体工学 / 変異 / SRタンパク質

Outline of Final Research Achievements

We have been developing an animal cell-displaying technology using the hypermutating B cell line DT40. In this study, we elucidated a function of a splicing factor, SRSF1, which we have previously found that is essential for hypermutation of the immunoglobulin gene, and developed a method to increase hypermutation efficiency by manipulation of SRSF1 expression.

Academic Significance and Societal Importance of the Research Achievements

標的に特異的に結合する抗体は、抗体医薬と呼ばれる副作用の低い次世代の分子標的治療薬として活用されてきている。抗体医薬開発での問題の一つに抗体ライブラリーの多様性の不足が考えられ、本研究は有用な活性を有する変異抗体を含む質の高い抗体ライブラリーの効率的作製に寄与しうる。

Research Products

• [Journal Article] Regulation of Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase kinase β by cAMP signaling. (2019)
  • Author(s): Takabatake S, Ohtsuka S, Sugawara T, Hatano N, Kanayama N, Magari M, Sakagami H, Tokumitsu H.
  • Journal Title: Biochim Biophys Acta Gen Subj. Volume: 1863 Issue: 4 Pages: 672-680
  • DOI: 10.1016/j.bbagen.2018.12.012
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Interaction of S100A6 with Target Proteins In Vitro and in Living Cells (2019)
  • Author(s): Sakane Kyohei、Yamaguchi Fuminori、Tsuchiya Mitsumasa、Kondo Rina、Kanayama Naoki、Magari Masaki、Hatano Naoya、Kobayashi Ryoji、Tokumitsu Hiroshi
  • Journal Title: Methods in Molecular Biology Volume: 1929 Pages: 367-377
  • DOI: 10.1007/978-1-4939-9030-6_23
  • ISBN: 9781493990290, 9781493990306
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Interleukin 34 (IL-34) cell-surface localization regulated by the molecular chaperone 78-kDa glucose-regulated protein facilitates the differentiation of monocytic cells (2018)
  • Author(s): Ogawa Sayaka、Matsuoka Yukiko、Takada Miho、Matsui Kazue、Yamane Fumihiro、Kubota Eri、Yasuhara Shiori、Hieda Kentaro、Kanayama Naoki、Hatano Naoya、Tokumitsu Hiroshi、Magari Masaki
  • Journal Title: Journal of Biological Chemistry Volume: 294 Issue: 7 Pages: 2386-2396
  • DOI: 10.1074/jbc.ra118.006226
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] SRSF1-3 contributes to diversification of the immunoglobulin variable region gene by promoting accumulation of AID in the nucleus (2017)
  • Author(s): Yuka Kawaguchi, Hiroaki Nariki, Naoko Kawamoto, Yuichi Kanehiro, Satoshi Miyazaki, Mari Suzuki, Masaki Magari, Hiroshi Tokumitsu, Naoki Kanayama
  • Journal Title: Biochemical and Biophysical Research Communications Volume: 485 Issue: 2 Pages: 261-266
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2017.02.097
  • NAID: 120006425839
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Identification and characterization of a centrosomal protein, FOR20 as a novel S100A6 target (2017)
  • Author(s): Kyohei Sakane, Miyu Nishiguchi, Miwako Denda, Fuminori Yamagchi, Masaki Magari, Naoki Kanayama, Ryo Morishita, Hiroshi Tokumitsu
  • Journal Title: Biochemical and Biophysical Research Communications Volume: 491 Issue: 4 Pages: 980-985
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2017.07.161
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] AMP-activated protein kinase-mediated feedback phosphorylation controls the Ca2+/calmodulin (CaM) dependence of Ca2+/CaM-dependent protein kinase kinase β (2017)
  • Author(s): Akihiro Nakanishi, Naoya Hatano, Yuya Fujiwara, Arian Sha'ri, Shota Takabatake, Hiroki Akano, Naoki Kanayama, Masaki Magari, Naohito Nozaki, Hiroshi Tokumitsu
  • Journal Title: Journal of Biological Chemistry Volume: 292 Issue: 48 Pages: 19804-19813
  • DOI: 10.1074/jbc.m117.805085
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Identification of striated muscle activator of Rho signaling (STARS) as a novel calmodulin target by a newly developed genome-wide screen. (2016)
  • Author(s): Yusui Furuya, Miwako Denda, Kyohei Sakane, Tomoko Ogusu, Sumio Takahashi, Masaki Magari, Naoki Kanayama, Ryo Morishita, Hiroshi Tokumitsu
  • Journal Title: Cell calcium Volume: 60 Issue: 1 Pages: 32-40
  • DOI: 10.1016/j.ceca.2016.04.004
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Differential AMP-activated Protein Kinase (AMPK) Recognition Mechanism of Ca2+/Calmodulin-dependent Protein Kinase Kinase Isoforms. (2016)
  • Author(s): Yuya Fujiwara, Yoshinori Kawaguchi, Tomohito Fujimoto, Naoki Kanayama, Masaki Magari, Hiroshi Tokumitsu
  • Journal Title: The Journal of biological chemistry Volume: 291 Issue: 26 Pages: 13802-13808
  • DOI: 10.1074/jbc.m116.727867
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Analysis of Distinct Roles of CaMKK Isoforms using STO-609-Resistant Mutants in Living Cells. (2015)
  • Author(s): Fujiwara Y, Hiraoka Y, Fujimoto T, Kanayama N, Magari M, Tokumitsu H.
  • Journal Title: Biochemistry Volume: 54 Issue: 25 Pages: 3969-3977
  • DOI: 10.1021/acs.biochem.5b00149
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Presentation] スプライシング因子の過剰発現及び標的遺伝子配列の操作によるニワトリ B 細胞株における遺伝 子変異の増強 (2018)
  • Author(s): 金山 直樹, 太田 愛美, 西山 由美子, 岡 知里, 曲 正樹, 徳光 浩
  • Organizer: 第70回 日本生物工学会大会
• [Presentation] CaMKKβシグナル伝達のAMPKおよびPKAによるリン酸化制御機構の解明 (2018)
  • Author(s): 大塚 里美, 高畠 翔太, 金山 直樹, 曲 正樹, 徳光 浩
  • Organizer: 第91回 日本生化学会大会
• [Presentation] 濾胞樹状細胞が発現するIL-34の免疫学的作用についての解析 (2018)
  • Author(s): 松岡 由希子, 小川 紗也香, 安原 詩織, 金山 直樹, 德光 浩, 曲 正樹
  • Organizer: 第41回 日本分子生物学会年会
• [Presentation] 濾胞樹状細胞により誘導される単球系細胞によるB細胞活性化メカニズムの解明 (2018)
  • Author(s): 高田 美帆, 鳥家 雄二, 稗田 健太郎, 金山 直樹, 德光 浩, 曲 正樹
  • Organizer: 第41回 日本分子生物学会年会
• [Presentation] GRP78により発現制御される濾胞樹状細胞表面のIL-34が単球系細胞の分化に関与する (2018)
  • Author(s): 小川 紗也香, 松岡 由希子, 高田 美帆, 松井 一恵, 山根 文寛, 安原 詩織, 金山 直樹, 波多野 直哉, 徳光 浩, 曲 正樹
  • Organizer: 第41回 日本分子生物学会年会
• [Presentation] 抗体遺伝子変異能力を操作できるニワトリB細胞を用いた動物細胞ディスプレイ (2017)
  • Author(s): 金山 直樹, 太田 愛美, 西山 由美子, 清木 俊雄, 植月 英智, 川口 祐加, 仲尾 祐輝, 曲 正樹, 徳光 浩
  • Organizer: 第69回 日本生物工学会大会
• [Presentation] スプライシング因子の過剰発現及び標的遺伝子配列の操作によるニワトリB細胞株における遺伝子変異の増強 (2017)
  • Author(s): 太田 愛美、西山 由美子、曲 正樹、徳光 浩、金山 直樹
  • Organizer: 2017年度生命科学系学会合同年次大会
• [Presentation] 抗体遺伝子変異の転写関連過程におけるSRSF1-3の役割の解析 (2017)
  • Author(s): 金山 直樹、川口 祐加、横山 和輝、石橋 朋之、曲 正樹、徳光 浩
  • Organizer: 2017年度生命科学系学会合同年次大会
• [Presentation] AID発現とSHM誘導におけるBCRシグナルの役割 (2017)
  • Author(s): 梶浦 雄也、金廣 優一、曲 正樹、徳光 浩、金山 直樹
  • Organizer: 2017年度生命科学系学会合同年次大会
• [Presentation] AID発現とSHM誘導におけるBCRシグナルの役割 (2016)
  • Author(s): 梶浦 雄也、金廣 優一、有年 由貴子、曲 正樹、徳光 浩、金山 直樹
  • Organizer: 第39回 日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • Year and Date: 2016-12-02
• [Presentation] 抗体遺伝子変異における転写依存性過程におけるSRSF1-3の役割の解析 (2016)
  • Author(s): 川口 祐加、横山 和輝、河本 奈緒子、成木 弘明、松山 雄磨、金廣 優一、曲 正樹、大森 斉、徳光 浩、金山 直樹
  • Organizer: 第39回 日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • Year and Date: 2016-12-02
• [Presentation] 抗体遺伝子高頻度突然変異におけるssDNA形成へのSRSF1-3の関与の解析 (2016)
  • Author(s): 横山 和輝、川口 祐加、松山 雄磨、河本 奈緒子、成木 弘明、徳光 浩、曲 正樹、金山 直樹
  • Organizer: 第39回 日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • Year and Date: 2016-12-02
• [Presentation] SRSF1-3の高度保存領域が抗体遺伝子変異に寄与する (2016)
  • Author(s): 成木 弘明、川口 祐加、宮崎 誠士、河本 奈緒子、横山 和輝、徳光 浩、曲 正樹、金山 直樹
  • Organizer: 第39回 日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • Year and Date: 2016-12-02
• [Presentation] スプライシング因子過剰発現による B 細胞株における抗体遺伝子変異の増強 (2016)
  • Author(s): 太田 愛美, 西山 由美子, 清木 俊雄, 植月 英智, 川口 祐加, 仲尾 祐輝, 曲 正樹, 徳光 浩, 金山 直樹
  • Organizer: 第68回 日本生物工学会大会
  • Place of Presentation: 富山国際会議場（富山県富山市）
  • Year and Date: 2016-09-29
• [Presentation] ニワトリSRSF1-3の抗体遺伝子変異における機能部位の探索 (2015)
  • Author(s): 155成木 弘明, 川口 祐加, 宮崎 誠士, 河本 奈緒子, 横山 和輝, 徳光 浩, 曲 正樹, 金山 直樹
  • Organizer: BMB2015
  • Place of Presentation: 神戸国際会議場･展示場
  • Year and Date: 2015-12-02
• [Presentation] ニワトリ B 細胞株における BCR シグナル依存性アポトーシスの制御による高親和性抗体の作製 (2015)
  • Author(s): 金山 直樹, 古賀 舞, 池田 美香, 小嶋 宏侑, 曲 正樹, 徳光 浩, 大森 斉
  • Organizer: 第67回日本生物工学会大会
  • Place of Presentation: 鹿児島市
  • Year and Date: 2015-10-27
• [Presentation] ニワトリB細胞株DT40におけるヒト型抗体の産生増強 (2015)
  • Author(s): 中谷 耕治, 檀上 悟史, 曲 正樹, 徳光 浩, 金山 直樹
  • Organizer: 第67回日本生物工学会大会
  • Place of Presentation: 鹿児島市
  • Year and Date: 2015-10-27
• [Remarks] 細胞機能設計学研究室
  • URL: http://www.okayama-u.ac.jp/user/saibou/index.html
• [Remarks] http://www.okayama-u.ac.jp/user/saibou/index.html