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Development of a live cell imaging method for visualization of epigenetic dynamics at a single locus

Research Project

Project/Area Number 18K06062
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

Allocation TypeMulti-year Fund
Section一般
Review Section Basic Section 43010:Molecular biology-related
Research InstitutionKyushu University

Principal Investigator

Okada Satoshi  九州大学, 医学研究院, 助教 (30734488)

Project Period (FY) 2018-04-01 – 2021-03-31
Project Status Completed (Fiscal Year 2020)
Budget Amount *help
¥4,420,000 (Direct Cost: ¥3,400,000、Indirect Cost: ¥1,020,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
Fiscal Year 2019: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2018: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
KeywordsBiFC / 可視化 / 生細胞イメージング / 出芽酵母 / GFP結合タンパク質 / CRISPR/Cas / CRISPR/Cas9 / イメージング / エピジェネティクス / ヒストン修飾
Outline of Final Research Achievements

At present, no method allows us to simultaneously investigate when, in which cell, which type of modification, and at which position in the genome post-translational modifications of histones occur. We are attempting to develop elemental technologies to construct such a method. Specifically, we attempted to improve the BiFC to visualize histone modification changes at specific loci. We found that co-expression of GFP-binding proteins enhances the BiFC signal and delays the fading effect of GFP-derived fluorescent proteins.

Academic Significance and Societal Importance of the Research Achievements

BiFCは生きた細胞の中で2つのタンパク質が近接したことを検出することのできる手法である。ヒストン修飾の変化を生細胞内で追跡する手法を実現するためには、BiFCによって再構成されたタンパク質の輝度と光安定性を高める必要がある。
本研究では、GFP結合タンパク質を共発現させることで、GFP由来蛍光タンパク質のBiFCシグナルの増強効果が得られることを見出した。この現象は、複数のGFP由来蛍光タンパク質で生じ、かつ、細胞質および細胞核内でのタンパク質間相互作用によるBiFCを増強できることを確認した。上記のBiFCの増強効果はBiFCを利用する系に幅広く適用できる可能性がある。

Report

(4 results)
  • 2020 Annual Research Report   Final Research Report ( PDF )
  • 2019 Research-status Report
  • 2018 Research-status Report
  • Research Products

    (11 results)

All 2021 2020 2019 2018

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results,  Open Access: 1 results) Presentation (10 results)

  • [Journal Article] Catalytically inactive Cas9 impairs DNA replication fork progression to induce focal genomic instability2021

    • Author(s)
      Doi Goro、Okada Satoshi、Yasukawa Takehiro、Sugiyama Yuki、Bala Siqin、Miyazaki Shintaro、Kang Dongchon、Ito Takashi
    • Journal Title

      Nucleic Acids Research

      Volume: 49 Issue: 2 Pages: 954-968

    • DOI

      10.1093/nar/gkaa1241

    • Related Report
      2020 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Presentation] 出芽酵母向けゲノム編集ツールについて2020

    • Author(s)
      岡田 悟
    • Organizer
      酵母研究若手の会 第6回研究会
    • Related Report
      2020 Annual Research Report
  • [Presentation] 簡便に利用できる出芽酵母ゲノム編集向けプラスミドシリーズの構築2020

    • Author(s)
      岡田 悟、土井吾郎、楠元恵美子、伊藤隆司
    • Organizer
      酵母遺伝学フォーラム 第53回研究報告回
    • Related Report
      2020 Annual Research Report
  • [Presentation] CRISPRとBiFC を利用して特定遺伝子座へのタンパク質リクルートメントを生細胞内で可視化する手法2019

    • Author(s)
      岡田悟、中川志都美、神野聖也、伊藤隆司
    • Organizer
      日本ゲノム編集学会 第4回大会
    • Related Report
      2019 Research-status Report
  • [Presentation] Rad52の画像解析を利用してin vivoでのガイドRNAの機能性を評価する2019

    • Author(s)
      岡田悟、中川志都美、伊藤隆司
    • Organizer
      酵母遺伝学フォーラム 第52回研究報告会
    • Related Report
      2019 Research-status Report
  • [Presentation] A simple microscopic method to evaluate in vivo functionality of guide RNAs by imaging Rad522019

    • Author(s)
      岡田悟、中川志都美、伊藤隆司
    • Organizer
      日本分子生物学会 第42回年会
    • Related Report
      2019 Research-status Report
  • [Presentation] dCas9はタンデムリピート配列のコピー数を不安定化させる2019

    • Author(s)
      土井 吾郎、岡田 悟、伊藤隆司
    • Organizer
      日本分子生物学会 第42回年会
    • Related Report
      2019 Research-status Report
  • [Presentation] 出芽酵母でのCRISPR/Cpf1 システムの利用について2019

    • Author(s)
      岡田 悟
    • Organizer
      酵母研究若手の会第5回研究会
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      2018 Research-status Report
  • [Presentation] CRISPRとBiFCを利用した遺伝子座特異的タンパク質-タンパク質近接イベント可視化手法の開発2018

    • Author(s)
      岡田 悟、中川志都美、神野聖也、伊藤隆司
    • Organizer
      第12回日本エピジェネティクス研究会年会
    • Related Report
      2018 Research-status Report
  • [Presentation] CRISPRとBiFCを利用した遺伝子座特異的なタンパク質間近接事象の可視化2018

    • Author(s)
      岡田 悟、中川志都美、神野聖也、伊藤隆司
    • Organizer
      第51回酵母遺伝学フォーラム研究報告会
    • Related Report
      2018 Research-status Report
  • [Presentation] CRISPRとBiFCを利用して特定遺伝子座へのタンパク質リクルートメントを生細胞内で可視化する手法の開発2018

    • Author(s)
      岡田 悟、中川志都美、神野聖也、伊藤隆司
    • Organizer
      第41回日本分子生物学会年会
    • Related Report
      2018 Research-status Report

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Published: 2018-04-23   Modified: 2022-01-27  

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