Reconstitution of protein synthesis system of mammals

• Project/Area Number: 19580113
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 一般
• Research Field: Applied biochemistry
• Research Institution: University of Hyogo (2008-2009); The Institute of Physical and Chemical Research (2007)
• Principal Investigator: IMATAKA Hiroaki University of Hyogo, 大学院・工学研究科, 教授 (50201942)
• Project Period (FY): 2007 – 2009
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2009)
• Budget Amount: ¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000); Fiscal Year 2009: ¥910,000 (Direct Cost: ¥700,000、Indirect Cost: ¥210,000); Fiscal Year 2008: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000); Fiscal Year 2007: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000)
• Keywords: タンパク質合成 / 無細胞システム / 翻訳 / 翻訳因子 / 再構成 / ほ乳動物細胞 / セルフリー合成 / 翻訳開始 / ペプチド合成

Research Abstract

We purified mammalian translation initiation factors : eIF1, eIF1A, eIF2, eIF2B, eIF3, eIF4E, eIF4A, eIF4B, eIF4G, eIF5, eIF5B, elongation factors : eEF1A eEF1B・eEF2, termination factors : eRF1、eRF3, aminoacyl tRNA, and ribosome subunits (40S, 60S). By mixing all these factors, we successfully established a reconstituted protein synthesis system derived from mammals.

Research Products

• [Journal Article] N-terminally truncated GADD34 proteins are convenient translation enhancers in a human cell-derived in vitro protein synthesis system. (2010)
  • Author(s): Satoshi Mikami, Tominari Kobayashi, Kodai Machida, Mamiko Masutani, Shigeyuki Yokoyama, Hiroaki Imataka
  • Journal Title: Biotechnology letters DOI: 10. 1007/s10529-010-0251-7
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] (2010)
  • Author(s): Satoshi Mikami
  • Journal Title: Cell-free protein production : Methods and Protocols(Human Press) Pages: 43-52
• [Journal Article] General RNA-binding proteins have a function in poly(A)-binding protein-dependent translation (2009)
  • Author(s): Y.Svitkin
  • Journal Title: EMBO J. 28 Pages: 58-68
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Requirement of RNA-binding of Mammalian eIF4GI for Efficient Interaction of eIF4E with mRNA Cap (2009)
  • Author(s): A.Yanagiya
  • Journal Title: Mol.Cell.Biol. 29 Pages: 1661-1669
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Crystal structure of the α subunit of human translation initiation factor 2B (2009)
  • Author(s): T.B.Hiyama
  • Journal Title: J.Mol.Biol. 392 Pages: 937-951
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The ELAV protein HuD stimulates cap-dependent translation in a poly(A)-and eIF4A-dependent manner (2009)
  • Author(s): A.Fukao
  • Journal Title: Mol.Cell 36 Pages: 1007-1017
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] (2009)
  • Author(s): 今高寛晃
  • Journal Title: ヒト細胞由来無細胞タンパク質合成システムの魅力(日本生化学会 生化学) Pages: 303-307
• [Journal Article] (2009)
  • Author(s): 今高寛晃
  • Journal Title: 翻訳開始の制御(共立出版 蛋百質 核酸 酵素) Pages: 2213-2218
• [Journal Article] A human cell-derived in vitro coupled transcription/translation system (2008)
  • Author(s): Satoshi Mikami, Tominari Kobayashi, Mamiko Masutani, Shigeyuki Yokoyama, Hiroaki Imataka
  • Journal Title: optimized for production of recombinant proteins Protein Expr. Purif 62 Pages: 190-198
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A human cell-derived in vitro coupled transcription/translation system optimized for production of recombinant proteins (2008)
  • Author(s): Satoshi Mikami
  • Journal Title: Protein Expr. Purif 62 Pages: 190-198
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] An improved cell-free system for picornavirus synthesis (2007)
  • Author(s): Tominari Kobayashi, Satoshi Mikami, Shigeyuki Yokoyama, Hiroaki Imataka
  • Journal Title: J. Virol. Methods 142 Pages: 182-188
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Reconstitution reveals the functional core of mammalian eIF3 (2007)
  • Author(s): Mamiko Masutani
  • Journal Title: EMBO J 26 Pages: 3373-3383
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 試験菅内ウイルス粒子合成技術の開発 (2010)
  • Author(s): 今高寛晃
  • Organizer: 第14回けいはんなシーズフォーラム
  • Place of Presentation: 中ノ島センタービル、大阪市
  • Year and Date: 2010-01-26
• [Presentation] 試験菅内ウイルス粒子合成技術の開発 (2010)
  • Author(s): 今高寛晃
  • Organizer: 第14回 けいはんなシーズフォーラム
  • Place of Presentation: 大阪市
  • Year and Date: 2010-01-26
• [Presentation] 感染細胞のウイルス合成を再現するヒト細胞由来無細胞タンパク質合成系の開発 (2009)
  • Author(s): 小林富成
  • Organizer: 第32回日本分子生物学会
  • Place of Presentation: 横浜市
  • Year and Date: 2009-12-09
• [Presentation] ヒト細胞由来セルフリータンパク質合成システムを用いたタンパク質複合体の合成 (2009)
  • Author(s): 三上暁
  • Organizer: 第32回日本分子生物学会
  • Place of Presentation: 横浜市
  • Year and Date: 2009-12-09
• [Presentation] 感染細胞のウイルス合成を再現するヒト細胞由来無細胞タンパク質合成系の開発 (2009)
  • Author(s): 小林富成
  • Organizer: 第4回 無細胞生命科学研究会
  • Place of Presentation: 下呂市
  • Year and Date: 2009-11-16
• [Presentation] 真核細胞特異的/翻訳依存的タンパク質プロセシング:セルフリーシステムによる解析 (2009)
  • Author(s): 三上暁
  • Organizer: 第4回 無細胞生命科学研究会
  • Place of Presentation: 下呂市
  • Year and Date: 2009-11-16
• [Presentation] A novel human in vitro translation system for glycoprotein expression (2009)
  • Author(s): K. Vattem, S. Mikami, K. Maas, E. Hommema, A. Morgan, M. Schofield, B. Webb, A. Deshpande, H. Imataka
  • Organizer: 第8回国際プロテオミクス会議
  • Place of Presentation: トロント
  • Year and Date: 2009-09-28
• [Presentation] Human Cell-Derived in vitro Coupled Transcription/Translation Systems (2009)
  • Author(s): S Mikami, K Machida S Yokoyama, H Imataka
  • Organizer: 第8回国際プロテオミクス会議
  • Place of Presentation: トロント
  • Year and Date: 2009-09-28
• [Presentation] Human Cell-Derived in vitro Coupled Transcription/Translation Systems (2009)
  • Author(s): 今高寛晃
  • Organizer: 第8回 国際プロテオミクス会議
  • Place of Presentation: トロント
  • Year and Date: 2009-09-28
• [Presentation] A novel human in vitro translation system for glycoprotein expression (2009)
  • Author(s): K.Vattem
  • Organizer: 第8回 国際プロテオミクス会議
  • Place of Presentation: トロント
  • Year and Date: 2009-09-28
• [Presentation] セルフリーRNAレプリコンシステムを用いたRNAウイルスの翻訳とRNA複製メカニズムの解析 (2009)
  • Author(s): 小林富成
  • Organizer: 第11回日本RNA学会年会
  • Place of Presentation: 新潟市
  • Year and Date: 2009-07-27
• [Presentation] ヒト細胞由来セルフリータンパク質合成システムの開発とその応用 (2008)
  • Author(s): 今高寛晃
  • Organizer: 大阪大学蛋白質研究所セミナー : 蛋白質合成法の最近の進歩と生命科学
  • Place of Presentation: 大阪大学
  • Year and Date: 2008-09-26
• [Presentation] 動物細胞由来セルフリータンパク質合成系の確立 (2008)
  • Author(s): 三上暁、小林富成、舛谷真美子、横山茂之、今高寛晃
  • Organizer: 2008年度日本農芸化学会
  • Place of Presentation: 名城大学、名古屋
• [Presentation] 動物細胞での共発現システムを用いたタンパク質複合体の再構成 (2007)
  • Author(s): 舛谷 真美子
  • Organizer: 第30回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜
  • Year and Date: 2007-12-14
• [Presentation] 強力なヒト細胞由来セルフリータンパク質合成システムの開発 (2007)
  • Author(s): 三上 暁
  • Organizer: 第30回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜
  • Year and Date: 2007-12-14
• [Presentation] 真核細胞翻訳開始因子eIF3のサブユニットの機能解析 (2007)
  • Author(s): 舛谷 真美子
  • Organizer: 第9回日本RNA学会年会
  • Place of Presentation: 名古屋国際会議場
  • Year and Date: 2007-07-30
• [Presentation] 強力なヒト細胞由来セルフリータンパク質合成システムの開発 (2007)
  • Author(s): 三上暁、小林富成、横山茂之、今高寛晃
  • Organizer: 第30回日本分子生物学会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜、横浜市
• [Book] Cell-free protein synthesis systems with extracts from cultured human cells. In: Endo, Y., Takai, K. and Ueda, T. (Eds.), Methods in Molecular Biology 607, Cell-free protein production: Methods and Protocols. (2010)
  • Author(s): Satoshi Mikami, Tominari Kobayashi, Hiroaki Imataka
  • Publisher: Human Press
• [Book] 大腸菌抽出液を用いた無細胞タンパク質合成系, タンパク質科学実験法1, タンパク質をつくるー抽出・精製と合成(長谷俊治、高尾敏文、高木淳一、編集) (2008)
  • Author(s): 横山茂之, 今高寛晃
  • Publisher: 化学同人
• [Book] mrnaの調製ほ乳動物細胞由来in vitro翻訳システムRNA実験ノート (2007)
  • Author(s): 今高寛晃
  • Publisher: 羊土社
• [Book] 翻訳開始の制御
  • Author(s): 今高寛晃、三上暁
  • Publisher: 蛋白質核酸酵素
• [Book] ヒト細胞由来無細胞タンパク質合成システムの魅力
  • Author(s): 今高寛晃、三上暁
  • Publisher: 生化学
• [Remarks]
  • URL: http://www.eng.u-hyogo.ac.jp/msc/msc15/index.html