Impact of conophylline on the progression in NASH
Project/Area Number |
20K08317
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Section | 一般 |
Review Section |
Basic Section 53010:Gastroenterology-related
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Research Institution | Aichi Medical University |
Principal Investigator |
中出 幸臣 愛知医科大学, 医学部, 教授 (70431400)
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Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
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Keywords | コノフィリン / 高脂肪食 / NASH / メタボローム解析 / Amylin liver NASH model / NAFLD / 高コレステロール食 / PPARA / トランスクリプトーム解析 |
Outline of Research at the Start |
非アルコール性脂肪性肝炎 (non-alcoholic steatohepatitis: NASH)は増加しているが治療法が確立していない。近年、キョウチクトウ科の植物である、エルバタミアマイクロフィラより抽出されるコノフィリンは肝星細胞の活性化を抑制することで肝硬変における肝線維化を抑制する効果が見いだされている。申請者らはコノフィリンをNASHモデルに導入しNASHの肝線維化のみならず、肝脂肪化を抑制することを見いだしてきた。そこで本研究ではコノフィリンによる肝脂肪化および線維化抑制機序をトランスクリプトーム解析およびメタボローム解析などから明らかにしていくことを目的にする。
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Outline of Annual Research Achievements |
NC群、NC + CnP群、HFHFHCD群、HFHFHCD + CnP群の各群のマウス肝よりmRNAを抽 出しトランスクリプトーム解析にて発現変動している遺伝子をスクリーニングした上で遺伝子プロファイリングを行い、各種遺伝子のパスウエイ解析の比較を行った。マウスの凍結肝組織からRNAを抽出しcDNAに逆転写させ、Whole mouse genome CGHマイクロアレイを用いて赤色蛍光色素(Cy3)で、それぞれのコントロールを緑色蛍光色素 (Cy5)で標識し、両者をスライドグラス上のプローブをハイブリダイズさせ、蛍光シグナル強度測定を行った。次にAgilent Feature Extraction Software(FES)を用いてマイクロアレイイメージファイルを読み出し、データ分析システムを用いて、各群における各遺伝子の信号強度を対照群との間で比率を算出し、MAPP Finderを用いて特定のpathwayに指定された範疇の遺伝子が偶 然より多く含まれているか評価した上で、各遺伝子発現値をPathwayマッピングし肝脂肪化、炎症および線維化に関連するシグナルに関してどのように変化しているか比較をすすめた。その結果、肝脂肪化に関しては、代謝亢進に関連したPPARA、CPT1、CPT2、ACOX1といった分子の発現がHFHFHCD + CnP群で亢進していた。また炎症に関してはTNFalpha、CD68、TLR4がHFHFHCD群で増加し、HFHFHCD + CnP群で減少していることが確認された。さらに肝線維化に関してはTGFbeta、TIMP1がHFHFHCD群で増加し、HFHFHCD + CnP群で減少していることが確認された。しかし、パスウエイ解析においては、肝脂肪化、炎症および線維化それぞれにおいて特定のパスウエイは見いだせなかった。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
これまでにHFHFHCDで肝脂肪化、炎症、線維化が誘導され、CnPを加えることでこれらが軽減した。またHFHFHCD群とHFHFHCD+CnP群の間に体重増加には差がみられないこと、さらに肝脂質のメタボローム解析にて、HFHFHCD+CnP群で肝TGは減少したが、PEおよびdMePEは増加した。代謝亢進に関連したPPARA、CPT1、CPT2、ACOX1といった分子の発現がHFHFHCD+CnP群で亢進していた。炎症に関してはTNFalpha、CD68、TLR4がHFHFHCD群で増加し、HFHFHCD+CnP群で減少していることが確認された。さらに肝線維化に関してはTGFbeta、TIMP1がHFHFHCD群で増加し、HFHFHCD + CnP群で減少していることが確認された。今年度はCnPのNASHおける肝脂肪化抑制にPPARalphaが関与しているという仮説のもと、PPARalpha knockoutマウスに対してHFHFHCDを用いてNASHを誘導し、CnPを投与することで肝脂肪化および肝線維化の改善の可否を検証する予定であったが、現在まで結果がでておらす。当初の予定より進行が遅れている。
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Strategy for Future Research Activity |
本年度は昨年度予定してたPPARalpha knockoutマウスおよびWildtypeマウスに対してHFHFHCDを30週間にわたり摂食させながらCnPを投与し、4週間毎に採血を行い血清AST、ALT、TNF-alpha、IL-6、インスリンおよび血糖を測定し、マウスを屠殺して採血の後、血清AST、ALT、TNF-alpha、IL-6、インスリンおよび血糖を測定し経時的変化を比較する予定である。また肝における脂肪化、炎症細胞浸潤および線維化の組織学的比較を予定していく。またin vitroの系においてHep3B細胞に対してパルミチン酸を用いて脂肪化誘導を行い、CnPを投与することで、肝脂肪化が抑制されるか検証を行う予定である。
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Report
(3 results)
Research Products
(3 results)