STILによるタイトジャンクション減弱機構の解明と非浸潤性乳管癌病理診断への応用
Project/Area Number |
20K16205
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Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Review Section |
Basic Section 49020:Human pathology-related
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Research Institution | Aichi Medical University |
Principal Investigator |
伊藤 秀明 愛知医科大学, 医学部, 講師 (90711276)
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Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥3,380,000 (Direct Cost: ¥2,600,000、Indirect Cost: ¥780,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
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Keywords | 乳癌 / タイトジャンクション / ソニックヘッジホッグ / 細胞極性 / 浸潤 |
Outline of Research at the Start |
乳癌をはじめとする癌細胞では、細胞接着の減弱及び細胞極性の喪失により浸潤が引き起こされると考えられている。しかし、その分子機序はこれまで殆ど明らかにされていない。本研究では、乳癌で発現が亢進しているヘッジホッグ関連因子・中心体複製関連因子であるSTIL(SCL/TAL1 interrupting locus)によるタイトジャンクション減弱機構を分子細胞生物学的手法と病理組織学的解析の両面から明らかにし、病理組織診断におけるこれまでにない非浸潤性乳管癌の浸潤リスク評価法を確立することを目指している.
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Outline of Annual Research Achievements |
乳癌をはじめとする癌細胞では、細胞接着の減弱及び細胞極性の喪失により浸潤が引き起こされると考えられている。特に、非浸潤性乳管癌では、細胞接着の減弱化やそれに伴う細胞極性の喪失が浸潤性乳管癌に至る過程で生じていると考えられている。しかし、その分子メカニズムはこれまでほとんど明らかにされていない。我々は乳癌で発現が亢進しているヘッジホッグ関連因子かつ中心小体複製関連因子であるSTIL(SCL/TAL1 interrupting locus)がTRAF4を介してタイトジャンクションの減弱を引き起こしていると考えられる知見を得た。本研究では、STILによるタイトジャンクション減弱機構を分子細胞生物学的手法と病理組織学的解析の両面から明らかにし、病理組織診断におけるこれまでにない非浸潤性乳管癌の浸潤リスク評価法の確立を目指している。これまでに、乳癌を含む培養細胞を用いてProximity ligation assay(PLA法)及び免疫沈降法を施行することによりSTIL-TRAF4の結合をin situおよびin vitroで確認している。これらの成果は、細胞中でSTIL-TRAF4が複合体を形成していること示唆する結果である。 昨年度、タイトジャンクションの減弱メカニズムに、STILによるCortactinのタイトジャンクションへの集積及びリン酸化が関与していると考えられたため、STILとCortactinの複合体形成能について免疫沈降法を中心に解析を進めた。またCortactinの活性化型変異体および不活性化型変異体を作製し、解析を追加した。病理組織の解析については、微小浸潤癌や非浸潤性乳管癌を中心に解析を進めた。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
昨年度はタイトジャンクション減弱に関連すると考えられたCortactinとSTILの結合について詳細な解析を追加し、遂行している。また、Cortactinの各ドメインのタグ付き変異体を作製し、STILの変異体とともに免疫沈降法中心として解析を行い、それぞれの結合部位の確認を進めている。 さらに、STILノックダウン乳癌細胞に対し、Cortactin活性型・不活性型変異体の導入実験を行うため、Cortactinのconstitutively activeな変異体およびinactiveな変異体も作製した。これら変異体を、乳癌培養細胞に導入し、タイトジャンクションの変化を解析する予定である。 乳癌病理組織検体に関しては、症例をさらに追加し、免疫染色により解析を進めている。
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Strategy for Future Research Activity |
引き続き、STIL-Cortactinの結合ドメインの検索を行うとともに、Cortactin活性型変異体、不活性型変異体を乳癌培養細胞に導入し、これらのタイトジャンクション部への集積およびタイトジャンクションの減弱を解析する予定である。 病理組織学的解析に関しては、微小浸潤癌や非浸潤性乳管癌の症例をさらに追加し、タイトジャンクションの減弱及びSTIL、Cortactinの発現、Cortactinのリン酸化の程度について解析を進める予定である。
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Report
(3 results)
Research Products
(7 results)
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[Journal Article] Establishment of Mucoepidermoid Carcinoma Cell Lines from Surgical and Recurrence Biopsy Specimens2023
Author(s)
Yamanaka S, Suzuki S, Ito H, Sivasundaram K, Hanamura I, Okubo I, Yoshikawa K, Ono S, Takahara T, Satou A, Tsuzuki T, Ueda R, Ogawa T, Fujimoto Y.
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Journal Title
International journal of molecular sciences
Volume: 24
Issue: 2
Pages: 1722-1722
DOI
Related Report
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Journal Article] ENTREP/FAM189A2 encodes a new ITCH ubiquitin ligase activator that is downregulated in breast cancer2022
Author(s)
Takumi Tsunoda, Miho Riku, Norika Yamada, Hikaru Tsuchiya, Takuya Tomita, Minako Suzuki, Mari Kizuki, Akihito Inoko, Hideaki Ito, Kenta Murotani, Hideki Murakami, Yasushi Saeki, Kenji Kasai
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Journal Title
EMBO reports
Volume: 23
Issue: 2
DOI
Related Report
Peer Reviewed / Open Access
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