腎細胞癌におけるMicroRNA-204-5pおよびTRPM3の機能解析
Project/Area Number |
20K16450
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Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Review Section |
Basic Section 50020:Tumor diagnostics and therapeutics-related
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Research Institution | Kumamoto University |
Principal Investigator |
倉橋 竜磨 熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 助教 (80867945)
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Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2023: ¥780,000 (Direct Cost: ¥600,000、Indirect Cost: ¥180,000)
Fiscal Year 2022: ¥780,000 (Direct Cost: ¥600,000、Indirect Cost: ¥180,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
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Keywords | 腎癌 / miRNA-204 / TFE3 / 転座型腎癌 / micro-RNA / micro RNA / TRPM |
Outline of Research at the Start |
申請者が先行研究においてマウスモデルの尿で確認したmiR-204-5pとそれに関連するTRPM3遺伝子が転座型腎癌を含む腎悪性腫瘍においてどのような役割を担っているのか明らかにすることが本研究の核である。miR-204-5p、TRPM3遺伝子の発現を変化させることで、腎癌細胞にどのような影響を与えるかを解析する。その結果、詳細な分子機構が明らかになれば、転座型腎癌の病態解明や診断方法の拡充につながることが期待される。
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Outline of Annual Research Achievements |
ヒト近位尿細管HK2細胞で融合TFE3(PRCC-TFE3)のドキシサイクリン依存的発現誘導細胞株を作製し、PRCC-TFE3が恒常活性型の転写因子として働き、標的遺伝子の発現を亢進させることを見出し報告してきた。また、PRCC-TFE3がTRPM3とmiR-204-5pの発現を誘導していることが示唆されていた。そこで融合TFE3(PRCC-TFE3)のドキシサイクリン依存的発現誘導細胞株を用い、PRCC-TFE3に対するクロマチン免疫沈降シーケンシングを実施した。その結果、TRPM3のイントロン1内にPRCC-TFE3キメラタンパク質が結合する部位を3か所見出した。この為、TFE3結合配列に変異を導入してmiR-204-5pの遺伝子発現を抑制することは困難であることが予測された。そこで、miR-204-5p 自体に変異を導入する方針に変更した。融合TFE3(PRCC-TFE3)のドキシサイクリン依存的発現誘導細胞株を親株として、miR-204-5pを標的としたガイドRNAをデザインし、CRISPR/Cas9システムによりmiR-204-5pをノックアウトした細胞株を複数株樹立し、解析を進めている。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
PRCC -TFE3によるTRPM3とmiR204を介したAutophagyの制御が考えられる。これらの検証のためにCRISPR/Cas9システムによるPRCC-TFE3転座型腎細胞癌患者由来株(UOK120,124 )でのTFE3のKO株を作成している。
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Strategy for Future Research Activity |
現在樹立中の、PRCC-TFE3転座型腎細胞癌患者由来株(UOK120,124 )でのTFE3のKO株に関して、TFE3のシーケンスを確認した後、TRPM3とmiR-204-5pの発現挙動を解析する。さらにTFE3のKOによるAutophagyの制御機構の変化について解析を進める。
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Report
(3 results)
Research Products
(1 results)