Development of inhibitors for dimerization of N-protein using SARS-CoV-2 replicon system
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21K07044
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 49060:Virology-related
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| Research Institution | Kagoshima University |
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Principal Investigator |
池田 正徳 鹿児島大学, 医歯学域ヒトレトロウイルス学系, 教授 (30315767)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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| Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000)
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| Keywords | SARS-CoV-2 / Nタンパク質 / スプリットルシフェラーゼアッセイ / レプリコン / COVID-19 |
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| Outline of Research at the Start |
COVID-19の原因となるSARS-CoV-2は依然として流行が続いており、ワクチンと治療剤の開発は収束に向けた需要な因子となる。申請者は、感染性のない安全なSARS-CoV-2レプリコンを最近開発した。本研究では、ウイルスの増殖と粒子形成に重要なSARS-CoV-2のNタンパク質の２量体形成の評価系を開発し、Nタンパク質を標的とする治療剤候補を同定する。次に、SARS-CoV-2レプリコンを用いて化合物のウイルス増殖抑制能を評価する。さらに、治療剤候補化合物の化学構造を改変することでさらに強力な抗ウイルス剤を開発し、COVID-19流行の収束を目指したい。
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| Outline of Annual Research Achievements |
SARS-CoV-2のNタンパク質であると同時に複製にも重要な蛋白質であることが報告されている。Nタンパク質はダイマー形成することが知られており、本研級ではダイマー形成を評価できるアッセイ系を開発し阻害剤を見出すことを目的としている。昨年度までにSARS-CoV-2のNタンパク質にluciferaseのN末端側ドメイン(NRL)とC末端側ドメイン(CRL)をリンカーを挟んで融合タンパク質として発現するプラスミドを作成した。２つの Nタンパク質を含むプラスミドを細胞内にリポフェクションにて細胞内に導入後培養後細胞を回収しルシフェラーゼ活性を測定するとシグナルが確認できた。本年度は化合物ライブラリーを添加しルシフェラーゼ活性を抑制する候補物質のスクリーニングを開始した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
SARS-CoV-2のNタンパク質がダイマー形成するとルシフェラーゼ活性を測定できるスプリットアッセイ系を開発することができた。現在、開発したアッセイ系を用いてルシフェラーゼ活性を抑制するような低分子化合物のスクリーニングを実施している。リード化合物が得られれば最適化合成を実施する予定である。
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| Strategy for Future Research Activity |
現在、SARS-CoV-2のNタンパク質のダイマー形成を評価できるアッセイ系を開発し、ダイマー形成を阻害するようなリード化合物のスクリーニングを実施している。リード化合物が見つかった場合には最適化合成を実施する。リード化合物が見つからない場合にはインシリコスクリーニングの併用についても検討する。
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Report
(2 results)
Research Products
(5 results)
