腎細胞がん微小環境におけるCD8陽性T細胞と癌線維芽細胞の相互作用の病態解明

Research Project

Project/Area Number	21K09398
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Allocation Type	Multi-year Fund
Section	一般
Review Section	Basic Section 56030:Urology-related
Research Institution	Hiroshima University
Principal Investigator	北野弘之広島大学, 病院(医), 助教 (60721933)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	北台靖彦県立広島大学, 人間文化学部, 教授 (10304437) 仙谷和弘広島大学, 医系科学研究科(医), 講師 (30508164) 弓削亮広島大学, 病院(医), 講師 (70794791)
Project Period (FY)	2021-04-01 – 2024-03-31
Project Status	Granted (Fiscal Year 2022)
Budget Amount *help	¥3,900,000 (Direct Cost: ¥3,000,000、Indirect Cost: ¥900,000) Fiscal Year 2023: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000) Fiscal Year 2022: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000) Fiscal Year 2021: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Keywords	腎細胞癌 / 腎細胞癌微小環境
Outline of Research at the Start	癌微小環境は、癌細胞以外に、間質細胞と免疫細胞により構成されて、間質細胞と免疫細胞の局在により、癌は3つのphenotypeに分類されている。しかし、腎細胞癌において、これらphenotypeと癌の増殖・進展、予後との関連は報告されていない。私たちは、これまでに間質細胞の癌線維芽細胞(CAF)が癌の増殖に関与している事を明らかにしてきたが、間質細胞のなかで中心的役割を持つCAFと免疫細胞であるCD8陽性T細胞の相互作用を検証する事により、癌の増殖・進展に対する間質と腫瘍免疫の関りを解明できると考えている。
Outline of Annual Research Achievements	我々はこれまでに腎細胞癌の同所移植モデルマウスを用いて、骨髄由来幹細胞の一部が同所移植にて作製した腎細胞癌の間質にて癌関連線維芽細胞に分化することを証明している。本研究では癌関連線維芽細胞とCD8陽性T細胞が腎細胞癌微小環境にてどのような挙動を示すかを明らかにすることを目的としている。そのため癌関連線維芽細胞単体が腎癌細胞にどのような影響を及ぼすか明らかにするために、腎癌細胞株の細胞増殖と遊走能への影響を検証する事で確認した。まずは、ヒト骨髄由来幹細胞と転移性腎細胞癌株のCaki-1を用いて共培養し、細胞増殖と遊走能を確認した。同実験にてIncuCyteのTime-lapse Imagingを用いて、細胞増殖能と細胞遊走能を数値化して検証するだけではなく、可視化して検証した。まず骨髄由来幹細胞を培養したCondition Medium(CM)でCaki-1を培養したグループとCaki-1と骨髄由来幹細胞を直接接触させて共培養したグループでは、直接培養したグループにて有意に細胞増殖が増加した(p=0.0169)。また同様の2グループで遊走能を検証したが、Caki-1と骨髄由来幹細胞を直接培養したグループでは有意に遊走能が上昇した。骨髄由来幹細胞はPKHで標識していたため、Time-lapse imagingではスクラッチした培地に、骨髄由来幹細胞に先導されてCaki-1が遊走されることが明らかになった。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 3: Progress in research has been slightly delayed. Reason 昨年度と本年度はコロナ渦にて計画していた実験計画どおりに進行しなかった。研究室の使用制限も解除されており計画を推進する。
Strategy for Future Research Activity	本年度はMSCが癌関連線維芽細胞(CAF)に分化し、またCAFの腫瘍細胞に与える影響を明らかにした。当初の目的もありCD8陽性T細胞との関連を中心に検証していく。