Role of extracellular vesicles in the progression of macular degeneration
Project/Area Number |
21K14999
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Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Review Section |
Basic Section 42030:Animal life science-related
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Research Institution | Gifu Pharmaceutical University |
Principal Investigator |
大津 航 岐阜薬科大学, 薬学部, 特任講師 (50843091)
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Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
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Keywords | 分泌小胞 / 視細胞 / 網膜変性疾患 / ライソゾーム / 光障害 |
Outline of Research at the Start |
加齢黄斑変性をはじめとする黄斑変性疾患は、進行性に視細胞が脱落し、最悪の場合失明に至るが、現状治療法が存在しない。特に萎縮型加齢黄斑変性では、早期診断や治療の効果を評価するためのバイオマーカーの不足や、視細胞死の詳細な分子メカニズムが未解明であることが創薬の妨げになっている。本研究では視細胞由来の細胞外小胞に着目し、申請者が開発した新規遺伝子導入技術を用い、網膜変性の分子基盤の解明を目指す。
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Outline of Annual Research Achievements |
加齢黄斑変性は、加齢とともに黄斑の障害が不可逆的に進行し失明に至る網膜変性疾患である。世界的な高齢化傾向に伴い増加傾向にあるが、特に萎縮型とよばれるタイプでは有効な治療がないため、治療薬の開発が大きな課題となっている。申請者はプラスミドDNAを用いたマウスの錐体細胞優位に遺伝子導入する技術を開発し、視細胞における後期エンドソームの機能と役割を明らかにしてきた。後期エンドソームは多胞体とも呼ばれ、他の細胞への情報伝達を担っている細胞外小胞形成の場である。網膜の視細胞の特に外節の基部では多数の細胞外小胞が観察されることが古くから知られている一方で、これらの細胞外小胞の役割については多くは明らかになっていない。本研究では、網膜、特に視細胞における細胞外小胞の役割とそれらの分子基盤の解明を目的とする。当該年度は、細胞外小胞マーカーとして知られるテトラスパニン、CD63を基にしたレポーターを発現するプラスミドを作製し、マウス網膜由来細胞である661W細胞に発現させ、その分布を観察した。さらにin vivoの遺伝子導入技術を用いマウスの視細胞に発現にさせ、その分布を観察した。発現させたCD63レポーターは視細胞特異的テトラスパニンであるペリフェリン2とは異なる分布を示した。今後はこれらの作製したコンストラクトを用いて実験を実施し、細胞外小胞由来の成分について明らかにし、病態と関連する臨床応用可能なバイオマーカーの探索を試みる。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
作製したプラスミドベクターを用いマウスに遺伝子導入し、網膜におけるレポーターの発現について免疫組織染色で確認し、その分布を明らかにした。当初の計画通り細胞外小胞を分離しその性状を解析を実施しているが、当該年度中に完了することが出来なかったため、次年度も引き続き実験を継続する。
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Strategy for Future Research Activity |
前年度中に終えることがが出来なかった細胞外小胞の解析を実施する。その後、レポーターの細胞外領域に付加したタグによる分離・精製の手法を確立し、錐体細胞由来の細胞外小胞が検出可能かについて検証する。得られた画分のタンパク質の発現解析を実施し、視細胞特異的な内因性マーカータンパク質を同定する。遺伝子導入したマウスに対し、プラスミド共発現による遺伝子発現抑制や変異体発現などの処置を加え、網膜の組織学的解析を実施し、細胞外小胞の役割について明らかにしていく。
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Report
(2 results)
Research Products
(22 results)