| Project/Area Number |
22K15029
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
Basic Section 42040:Laboratory animal science-related
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
Ishibashi Riki 京都大学, 医生物学研究所, 助教 (20778279)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2024-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000)
Fiscal Year 2023: ¥2,210,000 (Direct Cost: ¥1,700,000、Indirect Cost: ¥510,000)
Fiscal Year 2022: ¥2,340,000 (Direct Cost: ¥1,800,000、Indirect Cost: ¥540,000)
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| Keywords | ゲノム編集 / 遺伝子ターゲッティング / CRISPR-Cas9 / CRISPR-Cas12a / CRISPRR-Cas12a / Gene targeting / pCriMGET_9-12a / in vivo / CRISPR-Cas / 核移行型ドナープラスミド / 遺伝子治療 |
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| Outline of Research at the Start |
本研究の目的は、長鎖ドナーDNAテンプレートの核移行を介した新規CRISPR-Cas遺伝子ターゲッティング技術の開発である。具体的には、初代培養細胞等の非分裂細胞およびマウス受精卵におけるドナーDNAプラスミドの核移行について検証し、高効率・高汎用性を備えた新規核移行型長鎖ドナーDNAプラスミドの開発を目指す。本研究により開発される高汎用型遺伝子ターゲッティング技術を用いて、様々な遺伝子改変実験動物、および細胞株の迅速な作出が可能になることに加え、新たな遺伝子治療法の開発に繋がることが期待される。
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| Outline of Final Research Achievements |
In this study, a highly versatile donor plasmid pCriMGET_9-12a （plasmid of synthetic CRISPR coded RNA target sequence-equipped donor plasmid mediated gene targeting via Cas9 and Cas12a）system was used to establish more than 20 new lines of genetically modified mice. It was also demonstrated that gene targeting using the pCriMGET_9-12a system is feasible in vivo in mice.
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| Academic Significance and Societal Importance of the Research Achievements |
本研究により開発されたpCriMGET_9-12a systemにより、CRISPR-Cas9だけではなくCRISPR-Cas12aを用いても効率的な長鎖DNAノックイン個体の樹立が可能となった。plasmid DNAはRIKEN BRCに寄託しオープンソースとすることで、様々な生命科学研究の発展に貢献することが期待される。また、pCriMGET_9-12a systemは生体内における遺伝子ターゲッティングにも利用可能である事が明らかとなり、非ウイルス型の生体内遺伝子ターゲッティング技術としてより安全な遺伝子治療法の開発に貢献することが期待される。
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