Project/Area Number |
22K16814
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Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Review Section |
Basic Section 56030:Urology-related
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Research Institution | Yamagata University |
Principal Investigator |
小澤 迪喜 山形大学, 医学部, 客員研究員 (10637218)
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Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2024-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000)
Fiscal Year 2023: ¥2,340,000 (Direct Cost: ¥1,800,000、Indirect Cost: ¥540,000)
Fiscal Year 2022: ¥2,340,000 (Direct Cost: ¥1,800,000、Indirect Cost: ¥540,000)
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Keywords | 腎細胞癌 / βアラニン / mTOR阻害剤 / 腎癌 / メタボローム |
Outline of Research at the Start |
我々は淡明細胞型腎癌手術標本を用いた網羅的代謝物解析(メタボローム解析)の結果を元に、新規バイオマーカーや新規治療の開発を目的として研究を開始し、メタボローム解析を終えている。本研究は有転移、限局性腎癌のメタボロームの比較から同定された代謝産物であるβアラニンとイノシトールの腎癌における役割と腎癌治療応用への可能性を検討する。
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Outline of Annual Research Achievements |
ヒト腎癌細胞株にmTOR阻害剤ラパマイシンを添加したところ、βアラニン値の変動は細胞間で様々であったが、イノシトールはすべての細胞株で上昇した。そこでβアラニンとエベロリムスの併用効果を調べるため、ヒト腎癌細胞株A498、786Oにβアラニンとエベロリムスを添加した。βアラニン単剤では細胞活性に変化を認めず、ラパマイシン単剤では若干の細胞増殖抑制効果を示したが、併用によりラパマイシン単剤よりも強い細胞活性抑制を示した。 さらにin vivoでの効果をみるため、ヌードマウスにA498株を皮下移植し、βアラニン、ラパマイシンの併用治療効果を見たところ、in vitroの結果と同様、併用で強い腫瘍増殖抑制効果を認めた。 現在、免疫系への影響を検討するためにマウス腎癌細胞RENCAの遺伝子編集を行っている。RENCAはマウス由来淡明細胞型腎癌とされているが、ヒト淡明細胞型腎癌で共通してみられるVHL遺伝子不活化がない。そこで、CRISPR/CAS9技術を用いてVHL不活化RENCA細胞を作成している。現在のところ、片側のアレル変異は誘導できているが、両アレル変異を誘導することができておらず、片側アレル変異をきたしているRENCA細胞を用いてさらにCRISPR/CAS9による遺伝子編集を加え、両アレルの変異誘導を試みている。 また、ラパマイシンとβアラニンの併用効果の確認はできたが、なぜ併用効果がみられたのか、分子細胞学的検討が行えておらず、シグナル伝達を中心に検討している。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
RENCA細胞の遺伝子編集によりVHL遺伝子のノックアウトを試みているが、両アレルのノックアウト細胞が作成できていないため。 ラパマイシンとβアラニンについて様々なシグナル伝達経路への影響を見ているが、細胞株による違いが大きく、全ての株に共通する異常が同定できないため。
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Strategy for Future Research Activity |
片側アレル変異をきたしているRENCA細胞を用いてさらにCRISPR/CAS9による遺伝子編集を加え、両アレルの変異誘導を試みている。 シグナル伝達経路について検討の幅を広げ検討する。
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