Development of comprehensive allergenic epitope exploring method by means of EXiLE and mass spectrometry

• Project/Area Number: 25460082
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Section: 一般
• Research Field: Biological pharmacy
• Research Institution: National Institute of Health Sciences
• Principal Investigator: NAKAMURA Ryosuke 国立医薬品食品衛生研究所, 医薬安全科学部, 室長 (50333357)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): NAKAMURA Rika 国立医薬品食品衛生研究所, 代謝生化学部, 研究員 (40643333)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2015)
• Budget Amount: ¥4,940,000 (Direct Cost: ¥3,800,000、Indirect Cost: ¥1,140,000); Fiscal Year 2015: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000); Fiscal Year 2014: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000); Fiscal Year 2013: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000)
• Keywords: アレルゲン / EXiLE法 / 質量分析法 / IgE / ルシフェラーゼ / エピトープ / 抗原抗体反応

Outline of Final Research Achievements

In the present study, we aimed to develop a new allergenic epitope exploring method by means of the EXiLE (IgE crosslinking-induced luciferase expression) testing method. The EXiLE test is based on the luciferase assay using humanized rat basophilic leukemia cells (RS-ATL8) that express human high-affinity IgE receptor (FcεRI). E-C1 and E-G5 are murine monoclonal IgE antibodies against ovalbumin (OVA), with and without degranulation activity, respectively. RS-ATL8 cells sensitized with E-C1 were reactive to OVA in the liquid phase, but not in the case of E-G5. However, immobilized OVA reacted to both E-C1 and E-G5. We next tried to detect EXiLE responses to epitope peptide of E-C1. It was impossible to detect directly-immobilized epitope peptide with ELISA or EXiLE assay. However, when the peptide was conjugated to a carrier protein, the IgE response was observed, particularly with EXiLE assay.

Research Products

• [Journal Article] Use of Humanized Rat Basophilic Leukemia Reporter Cell Lines as a Diagnostic Tool for Detection of Allergen-Specific IgE in Allergic Patients: Time for a Reappraisal? (2015)
  • Author(s): Falcone FH, Alcocer MJC, Okamoto-Uchida Y, Nakamura R
  • Journal Title: Curr Allergy Asthma Rep. Volume: 15 Issue: 11 Pages: 67-67
  • DOI: 10.1007/s11882-015-0568-3
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Drugs causing severe ocular surface involvements in Japanese patients with StevenseJohnson syndrome/toxic epidermal necrolysis (2015)
  • Author(s): Kaniwa N, Ueta M, Nakamura R, Okamoto-Uchida Y, Sugiyama E, Maekawa K, Takahashi Y, Furuya H, Yagami A, Matsukura S, Ikezawa Z, Matsunaga K, Sotozono C, Aihara M, Kinoshita S, Saito Y.
  • Journal Title: Allergology International Volume: 64 Issue: 4 Pages: 379-381
  • DOI: 10.1016/j.alit.2015.05.002
  • NAID: 130005290406
  • ISSN: 1323-8930, 1440-1592
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] IKZF1, a new susceptibility gene for cold medicine-related Stevens-Johnson syndrome/toxic epidermal necrolysis with severe mucosal involvement (2015)
  • Author(s): Ueta M, Sawai H, Sotozono C, Hitomi Y, Kaniwa N, Kim MK, Seo KY, Yoon KC, Joo CK, Kannabiran C, Wakamatsu TH, Sangwan V, Rathi V, Basu S, Ozeki T, Mushiroda T, Sugiyama E, Maekawa K, Nakamura R, Aihara M, Matsunaga K, Sekine A, Gomes JÁP, Hamuro J, Saito Y, Kubo M, Kinoshita S, Tokunaga K.
  • Journal Title: J. Allergy Clin. Immunol. Volume: 135 Issue: 6 Pages: 1538
  • DOI: 10.1016/j.jaci.2014.12.1916
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Genetic variants associated with phenytoin-related severe cutaneous adverse reactions (2014)
  • Author(s): Chung WH, Chang WC, Lee YS, Wu YY, Yang CH, Ho HC, Chen MJ, Lin JY, Hui RC, Ho JC, Wu WM, Chen TJ, Wu T, Wu YR, Hsih MS, Tu PH, Chang CN, Hsu CN, Wu TL, Choon SE, Hsu CK, Chen DY, Liu CS, Lin CY, Kaniwa N, Saito Y, Takahashi Y, Nakamura R, et al.
  • Journal Title: JAMA Volume: 312 Issue: 5 Pages: 525
  • DOI: 10.1001/jama.2014.7859
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Independent strong association of HLA-A*02:06 and HLA-B*44:03 with cold medicine-related Stevens-Johnson syndrome with severe mucosal involvement (2014)
  • Author(s): Ueta M, Kaniwa N, Sotozono C, Tokunaga K, Saito Y, Sawai H, Miyadera H, Sugiyama E, Maekawa K, Nakamura R, Nagato M, Aihara M, Matsunaga K, Takahashi Y, Furuya H, Muramatsu M, Ikezawa Z, Kinoshita S.
  • Journal Title: Sci Rep. Volume: 4 Issue: 1 Pages: 4862-4862
  • DOI: 10.1038/srep04862
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Anaphylactic transfusion reaction in homozygous haptoglobin deficiency detected by CD203c expression on basophils (2014)
  • Author(s): Iwamoto S, Yonekawa T, Azuma E, Fujisawa T, Nagao M, Shimada E, Nakamura R, Teshima R, Ohishi K, Toyoda H, Komada Y.
  • Journal Title: Pediatr Blood Cancer Volume: 61 Issue: 7 Pages: 1160
  • DOI: 10.1002/pbc.24965
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Use of Humanised Rat Basophilic Leukaemia Cell Line RS-ATL8 for the Assessment of Allergenicity of Schistosoma mansoni Proteins (2014)
  • Author(s): Wan D, Ludolf F, Alanine DG, Stretton O, Ali Ali E, Al-Barwary N, Wang X, Doenhoff MJ, Mari A, Fitzsimmons CM, Dunne DW, Nakamura R, Oliveira GC, Alcocer MJ, Falcone FH
  • Journal Title: PLoS Negl Trop Dis Volume: 8 Issue: 9 Pages: e3124-e3124
  • DOI: 10.1371/journal.pntd.0003124
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Low-affinity allergen-specific IgE in cord blood and affinity maturation after birth (2014)
  • Author(s): Kamemura N., Kawamoto N., Nakamura R., Teshima R., Fukao T., Kido H
  • Journal Title: J. Allergy Clin. Immunol Volume: 133 Issue: 3 Pages: 904
  • DOI: 10.1016/j.jaci.2013.09.034
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Expression of CD203c on basophils as a marker of immunoglobulin E-mediated l-asparaginase allergy (2014)
  • Author(s): Hino M, Shimojo N, Ochiai H, Inoue Y, Ando K, Chikaraishi K, Ota S, Okimoto Y, Sunami S, Nakamura R, Teshima R, Sato Y, Kohno Y
  • Journal Title: Leuk Lymphoma Volume: 55 Issue: 1 Pages: 92
  • DOI: 10.3109/10428194.2013.794944
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Tissue transglutaminase generates deamidated epitopes on gluten, increasing reactivity with hydrolyzed wheat protein-sensitized IgE (2013)
  • Author(s): Nakamura R, Nakamura R, Sakai S, Adachi R, Hachisuka A, Urisu A, Fukutomi Y, Teshima R.
  • Journal Title: J. Allergy Clin. Immunol. Volume: 132 Issue: 6 Pages: 1436
  • DOI: 10.1016/j.jaci.2013.07.017
  • Peer Reviewed
• [Presentation] セルベーストアッセイによる牛肉アレルギー患者血清中IgEの糖鎖抗原への反応性の解析 (2016)
  • Author(s): 岡本(内田)好海, 中村亮介, 千貫祐子, 若林翼, 打田光宏, 土屋敏行, 斎藤嘉朗, 森田栄伸
  • Organizer: 日本薬学会第136年会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜
  • Year and Date: 2016-03-27
• [Presentation] Drugs and HLA types associated with Stevens-Johnson syndrome/toxic epidermal necrolysis with severe ocular surface involvements in Japanese patients (2016)
  • Author(s): Nakamura R, Kaniwa N, Ueta M, Okamoto-Uchida Y, Sugiyama E, Maekawa K, Takahashi Y, Furuya H, Yagami A, Matsukura S, Ikezawa Z, Matsunaga K, Tokunaga K, Sotozono C, Aihara M, Kinoshita S, Saito Y.
  • Organizer: 1st International Stevens- Johnson Syndrome Symposium
  • Place of Presentation: ウェスティン都ホテル京都
  • Year and Date: 2016-01-24
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] EXiLE法を用いたモデル抗原のIgEエピトープ解析 (2015)
  • Author(s): 中村亮介, 岡本(内田)好海, 松澤由美子, 石井明子, 斎藤嘉朗
  • Organizer: 第22回日本免疫毒性学会学術年会
  • Place of Presentation: 京都大学百周年時計台記念館国際交流ホール
  • Year and Date: 2015-09-10
• [Presentation] 重篤副作用発症における感染症併発の影響 ― 横紋筋融解症及び重症薬疹の事例 ― (2015)
  • Author(s): 佐井君江, 中村亮介, 今任拓也, 岡本好海, 梶波康二, 松永佳世子, 相原道子, 斎藤嘉朗
  • Organizer: 第42回日本毒性学会学術年会
  • Place of Presentation: 金沢市アートホール
  • Year and Date: 2015-06-29
• [Presentation] 国内の動向：臨床試料を用いた安全性バイオマーカー探索と検証―セーフティートランスレーションにおける課題― (2015)
  • Author(s): 斎藤嘉朗, 前川京子, 齊藤公亮, 中村亮介, 熊谷雄治
  • Organizer: 第42回日本毒性学会学術年会
  • Place of Presentation: 金沢市アートホール
  • Year and Date: 2015-06-29
• [Presentation] EXiLE法を用いた経口免疫療法実施時における減感作状態の評価法の検討 (2015)
  • Author(s): 秋山晴代, 政岡智佳, 中村亮介, 小野佳代, 田中裕, 甲斐茂美, 栗原和幸, 宮澤眞紀
  • Organizer: 第64回日本アレルギー学会学術大会
  • Place of Presentation: グランドプリンスホテル新高輪
  • Year and Date: 2015-05-26
• [Presentation] 重症眼粘膜障害を伴うSJS/TENの発症と関連する被疑薬およびHLA型について (2015)
  • Author(s): 中村亮介, 鹿庭なほ子,上田真由美, 岡本(内田)好海, 杉山永見子, 高橋幸利, 古谷博和, 矢上晶子, 松倉節子, 池澤善郎, 松永佳世子, 徳永勝士, 外園千恵, 相原道子, 木下茂, 斎藤嘉朗
  • Organizer: 第64回日本アレルギー学会学術大会
  • Place of Presentation: グランドプリンスホテル新高輪
  • Year and Date: 2015-05-26
• [Presentation] 架橋誘導活性の異なるモノクローナルIgEの抗原認識様式の違いについて (2015)
  • Author(s): 岡本(内田)好海, 中村亮介, 相馬愛実, 石井明子, 最上知子, 川崎ナナ, 川上 浩, 手島玲子, 斎藤嘉朗
  • Organizer: 日本薬学会第135年会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2015-03-26 – 2015-03-28
• [Presentation] 口腔アレルギー症候群における新たなin vitro試験法の検討 (2015)
  • Author(s): 秋山晴代, 河又小夏, 政岡智佳, 中村亮介, 福冨友馬, 甲斐茂美, 松藤 寛, 宮澤眞紀
  • Organizer: 日本薬学会第135年会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2015-03-26 – 2015-03-28
• [Presentation] 新規培養細胞株を用いたインフュージョン反応惹起性の評価法開発 (2015)
  • Author(s): 中村亮介
  • Organizer: 平成26年度創薬基盤推進研究事業成果発表会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-02-26
  • Invited
• [Presentation] EXiLE法を用いた口腔アレルギー症候群の新たなin vitro検査法の検討 (2014)
  • Author(s): 秋山晴代, 河又小夏, 中村亮介, 福冨友馬, 甲斐茂美, 松藤 寛, 宮澤眞紀
  • Organizer: 第37回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2014-11-25 – 2014-11-27
• [Presentation] 新規蛋白チップによる臍帯血特異的IgEの検出と、離乳完了期までに見られるIgE抗体の低親和性から高親和性への変化 (2014)
  • Author(s): 亀村典生, 川本典生, 中村亮介, 手島玲子, 下条直樹, 深尾敏幸, 木戸 博
  • Organizer: 第51回日本小児アレルギー学会
  • Place of Presentation: 四日市
  • Year and Date: 2014-11-08 – 2014-11-09
• [Presentation] 「風邪薬」による重症眼粘膜障害を伴うスティーブンス・ジョンソン症候群及び中毒性表皮壊死症発症に関連するHLAについて (2014)
  • Author(s): 中村亮介, 鹿庭なほ子, 上田真由美, 外園千恵, 杉山永見子, 前川京子, 内田好海, 矢上晶子, 松倉節子, 池澤善郎, 松永佳世子, 徳永勝士, 相原道子, 木下 茂, 斎藤嘉朗
  • Organizer: 第21回日本免疫毒性学会学術年会
  • Place of Presentation: 徳島
  • Year and Date: 2014-09-11 – 2014-09-12
• [Presentation] 日本人のスティーブンス・ジョンソン症候群及び中毒性表皮壊死症患者における重症眼粘膜障害発症に関連する医薬品の傾向 (2014)
  • Author(s): 内田好海, 鹿庭なほ子, 上田真由美, 中村亮介, 杉山永見子, 高橋幸利, 古谷博和, 矢上晶子, 松倉節子, 池澤善郎, 松永佳世子, 外園千恵, 相原道子, 木下 茂, 斎藤嘉朗
  • Organizer: 第21回日本免疫毒性学会学術年会
  • Place of Presentation: 徳島
  • Year and Date: 2014-09-11 – 2014-09-12
• [Presentation] 培養細胞を用いるアレルギー試験「EXiLE法」の開発と応用 (2014)
  • Author(s): 中村亮介
  • Organizer: 第41回日本毒性学会学術年会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 2014-07-02 – 2014-07-04
  • Invited
• [Presentation] 臍帯血の抗原特異的低親和性IgE検出と，生後6，14ヶ月の高親和性IgEへの変化 (2014)
  • Author(s): 木戸 博，亀村典生，中村亮介, 手島玲子，深尾敏幸
  • Organizer: 第26回日本アレルギー学会春季臨床大会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2014-05-09 – 2014-05-11
• [Presentation] Biomarkers for risk of SJS/TEN in Japanese compared to other populations (2014)
  • Author(s): Nakamura R
  • Organizer: Drug Information Association
  • Place of Presentation: メリーランド（米国）
  • Year and Date: 2014-05-07 – 2014-05-09
  • Invited
• [Presentation] HLA association with antipyretic analgesics-induced Stevens-Johnson syndrome / toxic epidermal necrolysis with severe ocular surface complications in Japanese patients (2014)
  • Author(s): Nakamura R, Kaniwa N, Ueta M, Sotozono C, Sugiyama E, Maekawa K, Yagami A, Matsukura S, Ikezawa Z, Matsunaga K, Tokunaga K, Aihara M, Kinoshita S Saito Y
  • Organizer: Drug Hypersensitivity Meeting 2014
  • Place of Presentation: ベルン（スイス）
  • Year and Date: 2014-04-09 – 2014-04-12
• [Presentation] Medication tendencies for inducing severe ocular surface symptoms in Japanese Stevens-Johnson syndrome / toxic epidermal necrolysis patients (2014)
  • Author(s): Kaniwa N, Ueta M, Nakamura R, Sugiyama E, Maekawa K, Takahashi Y, Furuya H, Yagami A, Matsukura S, Ikezawa Z, Matsunaga K, Sotozono C, Aihara M, Kinoshita S, Yoshiro S
  • Organizer: Drug Hypersensitivity Meeting 2014
  • Place of Presentation: ベルン（スイス）
  • Year and Date: 2014-04-09 – 2014-04-12
• [Presentation] 抗原の加熱･消化･固相化がIgE架橋活性に及ぼす影響について (2014)
  • Author(s): 中村亮介，相馬愛実，中村里香，斎藤嘉朗，最上知子，川上 浩，手島玲子
  • Organizer: 日本薬学会第134年会
  • Place of Presentation: 熊本
• [Presentation] 小麦グルテンはトランスグルタミナーゼ処理により酸加水分解小麦と同様のIgE反応性を獲得する (2013)
  • Author(s): 中村亮介，中村里香，酒井信夫，安達玲子，宇理須厚雄，福冨友馬，手島玲子
  • Organizer: 第25回アレルギー学会春季臨床大会
  • Place of Presentation: 横浜
• [Presentation] EXiLE法を用いた卵白アルブミンのIgE架橋活性への加熱および固相化の影響の解析 (2013)
  • Author(s): 相馬愛実，中村亮介，中村里香，斎藤嘉朗，川上 浩，手島玲子
  • Organizer: 第19回日本食品化学学会
  • Place of Presentation: 名古屋
• [Presentation] 酸加水分解コムギ特異的患者血清IgEはトランスグルタミナーゼ処理コムギグルテンと交差反応する (2013)
  • Author(s): 中村亮介，中村里香，酒井信夫，安達玲子，斎藤嘉朗，宇理須厚雄，福冨友馬，手島玲子
  • Organizer: 第20回日本免疫毒性学会学術大会
  • Place of Presentation: 東京
• [Presentation] Human Cell Line Activation Test（h-CLAT）の医薬品のアレルゲン性評価試験法としての応用 (2013)
  • Author(s): 宇梶真帆，杉山永見子，中村亮介，斎藤嘉朗，打田光宏，土屋敏行，黒瀬光一
  • Organizer: 第20回日本免疫毒性学会学術大会
  • Place of Presentation: 東京
• [Presentation] EXiLE法を用いた牛乳アレルギー患者IgEに応答する 乳糖中に含まれるアレルゲンの解析 (2013)
  • Author(s): 唐澤未来，中村亮介，酒井信夫，安達玲子，斎藤嘉朗， 最上知子，山崎 壮，手島玲子
  • Organizer: 第106 回日本食品衛生学会学術講演会
  • Place of Presentation: 沖縄
• [Presentation] 加水分解コムギ感作血清中IgEのEXiLE法による検出とその有用性評価 (2013)
  • Author(s): 中村亮介，中村政志，矢上晶子，酒井信夫，中村里香，安達玲子，斎藤嘉朗，相原道子，秀 道広，千貫祐子，森田栄伸，松永佳世子，手島玲子
  • Organizer: 第63回アレルギー学会秋季学術大会
  • Place of Presentation: 東京
• [Book] 食物アレルギーの現状とリスク低減化食品素材の開発 (EXiLE法) (2015)
  • Author(s): 中村亮介
  • Total Pages: 299
  • Publisher: シーエムシー出版
• [Book] 食物アレルギーの現状とリスク低減化食品素材の開発 (2015)
  • Author(s): 監修：森山達哉, 穐山 浩
  • Total Pages: 299
  • Publisher: シーエムシー出版
• [Book] Basophils and Mast Cells (2014)
  • Author(s): Edited by Gibbs BF and Falcone FH
  • Total Pages: 251
  • Publisher: Humana Press