ペプチド・タンパク質のC末端アミノ酸残基の段階的分解法の確立

• Project/Area Number: 61571027
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Physical pharmacy
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 安原 義 東大, 薬学部, 助手 (90110444)
• Project Period (FY): 1986
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1986)
• Budget Amount: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000); Fiscal Year 1986: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000)
• Keywords: チオヒダントイン法 / エドマン分解 / ペプチドの段階的分解法 / ペプチドのC末端分析

Research Abstract

エドマン分解法に匹敵するC末端からの段階的な分解法を確立することはCDNAからのアミノ酸配列の決定法と補足しながら、巨大タンパク質のアミノ酸配列が微量迅速に決定出来る。チオヒダントイン法は、ペプチドのC末端アミノ酸を活性化し、これにチオシアン酸イオンを付加させ、次に、アルカリで切断する過程からなっている。従来の方法では、チオシアン酸イオンとして、チオシアン酸ナトリウムや、チオシアン酸のジオキサン溶液を用い、また、切断反応にイオン交換樹脂を用いたため、反応収率、副成物の除去、試薬の調整に手間がかかり、試料も1μmoleから100μmoleと多量を必要とした。本研究に於いて、高感度化と操作の簡略化を計り、下図のシステムを確立した。この結果、ナノモルスケールでモデルペプチドLev-GlyGlyやFor-Met-Lev-Pheのアミノ酸配列を求めることが出来た。
この方法では、Ser,Cys,Lys,Arg,Hisが反応せず、ペプチドの活性化の際、トリフルオロ酢酸5μlを加えることにより、Lys,Arg,Hisは反応させることは出来たが他のアミノ酸の収率が悪くなった。
現在、Ser,Cysの反応性の検討全アミノ酸の収率向上、チオヒダントインのHPLCによる一斉分析の確立を進めている。