家畜の抗病性品種作出に関する分子生物学的基礎研究

1992 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 01440017
• Research Institution: HOKKAIDO UNIVERSITY
• Principal Investigator: 波岡 茂郎 北海道大学, 獣医学部, 教授 (10002297)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 林 正信 北海道大学, 獣医学部, 助教授 (10130337) ; 笠井 憲雪 北海道大学, 医学部, 助教授 (60001947) ; 田口 文広 国立精神、神経センター, 神経研究所・モデル動物開発部, 室長 (30107429) ; 喜田 宏 北海道大学, 獣医学部, 助教授 (10109506) ; 橋本 信夫 北海道大学, 獣医学部, 教授 (60082103)
• Keywords: トランスシェニック動物 / アンチセンスRNA / ウイルス抵抗性 / マウス肝炎ウイルス / ヌクレオキャフシドタンパク質 / 分子生物学 / 家畜

Research Abstract

本研究は、ウイルスの増殖に必要な遺伝子に対するアンチセンスRNAを発現するトランスジェニック動物を作製し、当該ウイルス抵抗性品種の作出に関して検討することを目的としている。今年度は以下のような成績を得た。
1.作製されたマウス肝炎ウイルス(MHV)のヌクレオキャフシド(N)タンパク質の遺伝子に対するアンチセンスRNAを発現するトランスジェニックマウスの家系について感染実験を行った。すなわち、出生後1〜2日の新生児に600〜1.000PFUのMHVを感染させ、その生存率を検討したところ、対照の非トランスジェニックマウスでは感染後約3日目から死に始め5日目における生存率は20%程度であった。これに対し、2系統のトランスジェニックマウスの内1系統では明らかに生存率の改善がみられ、7日後でも約50%の生存率が得られ、8日以後の死亡は認められなかった。この成績はMHVのNタンパク遺伝子に対するアンチセンスRNAを発現するトランスジェニックマウスがMHVの致死的感染に対して抵抗性を有することを示した。今後、致死的感染に対するトランスジェニックマウスにおける抵抗性の発現機構やウイルス増殖の仰制における分子生物学的あるいは病理学的解析などが検討課題として考えられるが、本研究で得られた成績からアンチセンスRNAの発現によるいわゆる細胞内免疫によって個体に当該ウイルスに対する抵抗性を賦与できることが示され、家蓄・家禽へのその応用の可能性を強く示唆する成果を得た。
2.より効率よくウイルス遺伝子の発現を仰制するためにヒトのEF1プロモーターなど各種のプロモーターあるいはリボザイムの応用についても検討を行い培養細胞を使用して効果的にMHVの増殖を示すことが示され、今後、導入遺伝子を改善するための知見が得られた。

Research Products

• [Publications] Hayashi,M.: "Higher sensitivity of LEC strain rat in radiation-induced acute intestinal death." I.Vet.Med.Scl.54. 269-273 (1992)
• [Publications] Mizutani.T.: "lnhibition of mouse hepatitis virus multiplication by an oligonucleotide complementary to the leader RNA." I.Vet.Med.Scl.54. 465-472 (1992)
• [Publications] Yamashita,T.: "Unidirectional distribution of mosaicism in chimeric rats." Lab.Anim.Sci.42. 270-274 (1992)
• [Publications] Ilogai,E.: "Inhibitory effects of Japanese green tea extracts on growth of canine oral hacteria." Bifidobact.Microflora.11. (1992)
• [Publications] Isogai,E.: "Neutrophil dysfunction in rats with natural gingivitis." Archs.Oral Biol.(1992)
• [Publications] Hayashi,M.: "Hypersensitivity of LEC strain rats in radeation-induced acute bone marrow death." I.Vet.Med.Sci.55. 13-19 (1993)
• [Publications] Mizutani,T.: "Inhibition of mouse hepatitis virus multiplication by antisense oligonucleotide.antisense RNA.sense RNA and ribozyme." Coronavirus.Plenum Press,Paris.New York.(1993)
• [Publications] Ando,S.: "Immunoelectron microscopy of Chlamydea psittaci with monoclonal antibodies." Microhiol.Immunol.36. 113-121 (1992)
• [Publications] Yao,I.-S.: "Antibody-dependent enhancement of hantavirus infection in macrophage cell lines." Arch Virol. 122. 107-118 (1992)
• [Publications] Yao,I.-S.: "Effect of neutralizing monoclonal antibodies on Hantaan virus infection of the macrophage P388D1 cell line." Jpn.J.Vet.Res.40. 87-97 (1992)
• [Publications] 小松 眞由美: "特集/呼吸器感染症におけるクラミジア抗原検査法遺伝子増幅(PCR)法と制限酵素分析法の組み合せによるクラミジアの型別." Progress in Medicine. 12. (1992)
• [Publications] Ogasawara,K.: "A strategy for making synthetic peptide vaccines." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 89. 8995-8999 (1992)
• [Publications] Ohmura,Y.: "Detection of feline herpesuvirus 1 Franscripts in trigeminal ganglia of latently infected cats." Arch.Virol.KM/257.(1992)
• [Publications] Fujimoto,S.: "Establishment of a feline T-lymphoblastoid cell line suscepteble to fline immunodeficiency viruses." Microbiol.Immunol.(1993)
• [Publications] 喜田 宏: "2.インフルエンザウイルスの生態:新型ウイルスの出現機構とその予測." ウイルス. 42. (1992)
• [Publications] 喜田 宏: "インフルエンザウイルスの宿主域" タンパク質・核酸・酵素、. 37. 2785-2791 (1992)
• [Publications] Okayasu,T.: "lnherited Copper Toxicity in Long Evans Cinnamon Rats Exhibiting Spontaneous Hepatitis:A Model of Wilson's Disease." Ped.Res.31. 253-257 (1992)
• [Publications] Miyoshi,I.: "Useful short range transport of mouse embryos by means of a nonfreezing technique." Lah.Anim.Sci.,. 42. 198-201 (1992)
• [Publications] Miyoshi,I.: "A practical transport system for mouse embryos cryopreserved by simple vitrification." Lab.Anim.Sci.,. 42. 323-325 (1992)
• [Publications] Kasai,N.: "Effects of sex hormones on fulminat hepatitis in LEC rats:a model of Wilson's disease." Lab.Anim.Sci.,. 42. 363-368 (1992)
• [Publications] Taguchi,F.: "Molecular cloning and expression of a spike protein of neuro virulint murine coronavirus JHMV variant cl-2." J.Gen.Virol.73. 1065-1072 (1992)
• [Publications] Taguchi,F.: "Fusion formation by the uncleaved spide protein of murine coronavirus JHMV variant cl-2." J.Virol.(1993)
• [Publications] Yamada,Y.K.: "Detection of mouse hepatitis virus by the polymerase chain reaction and its applicability for the rapid diagnosis of infection." Lab.Anim.Sci.(1993)
• [Publications] Kubo,H.: "Neutralization and fusion inhibition activeties of monoclonal antibodies against ghe Sl subunit of spike protein of neurovirulent JHMV cl-2 variant." J.Gen.Virol.(1993)
• [Publications] Taguchi,F.: "Fusogenic properties of uncleaved spide protein of murine coronavirus JHMV." Adv.Exp.Biol.Med.(1993)
• [Publications] Taguchi,F.: "Fusogenic properties of uncleaved spike protein of murine coronavirus JHM." Coronaviruses.Plenum Press.Paris.New York.(1993)